CircRNAの準備には、サイクリングのための線状RNA(RNA前駆体)が必要であり、RNA前駆体は通常、線状化されたプラミドDNAを転写テンプレートとして使用し、T7 RNAポリメラーゼの助けを借りて体外で転写されます。
体外転写(IVT)には高品質のプラミドDNAが不可欠です。成熟したプラミド準備サービスプラットフォームに基づき、姚海バイオファーマは高純度かつ標準的な線状化されたプラミドDNA(pDNA)の準備サービスを提供し、IVT製品の完全性を確保します。
プロセス | オプションサービス | サービス詳細 | 納期(営業日) |
円形プラミドの準備 | 遺伝子合成 | 遺伝子合成(サードパーティ) | 7から10 |
プラミド増幅 | プラミド増幅 | 2 | |
プラミド抽出 | |||
線状プラミド準備 | プラミドの線形化と精製 | プラミド線状化 | 1 |
線状DNAの精製 | |||
プラズミドDNAの品質管理 | 濃度純度 | 紫外線(UV)分光光度計 | 1-2 |
プラミド構造 | アガロースゲル電気泳動 (AGE) | ||
キャピラリ電気泳動 (CE)-オプション | |||
プラミドの同定 | 制限酵素の識別/AGE |
線形化方法の柔軟な選択
DNA抽出および純化方法の最適化により、高い回収率を実現します。
厳格なプロセス管理基準で、研究用のプラミドサンプルの超螺旋構造率は80%以上です。
高水準かつ高効率のプラミド準備および品質管理サービスで、実験のニーズに応えます。
姚海バイオファーマの製品mCherry circRNAを例に取ると、転写テンプレートのプラミドサンプル(研究用)の超コイル比率は70%以上で、線形化率はほぼ100%に達しています。
mCherry circRNAは、線状化されたプラズミドをテンプレートとして準備され、293T細胞に転染されます。転染後24時間で高い蛍光発現(赤色蛍光)が検出され、48時間後に増強され、転染後の7日目と14日目にも依然として検出できます。
mCherryタンパク質は安定かつ効率的に発現され、転写テンプレートの純度は高品質のcircRNA医薬品(DP)の要件を満たします。
MCherry circRNAの体外発現確認