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mRNAの酵素によるキャッピング

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IVT RNA

mRNAの酵素によるキャッピング

5'末端キャピングはmRNAの必須修飾です。キャップ構造、特にCap1構造を持つmRNAは、体内で先天的免疫応答を回避し、効率的なタンパク質翻訳を促進します。

酵素キャピング（二段階法）は、真核生物におけるキャピングプロセスに類似した伝統的なmRNAキャピング方法です。一連の酵素の作用により、7-メチルグアニン（m7G）が5'-末端に5'-5' トリリン酸結合で結びつき、メチル化修飾を経てCap 1 (m7GpppN) 構造を形成します。

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自然なキャップ構造形成の図

酵素キャピング反応の流れは次の通りです：

線形化されたプラミドDNAをT7ポリマーを使って体外転写（IVT）のテンプレートとし、ワクシニアキャッピング酵素および2'-O-メチルトランスフェラーゼを使用して一歩の精製後に5'末端キャップ構造を持つmRNAが形成されます。

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納期（日）

mRNAの酵素によるキャッピング

酵素によるキャピング反応

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キャピング反応の最適化 - オプション

反応成分の設計と最適化

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私たちの特徴
  • キャピング反応成分の設計と最適化

キャピング反応成分が最適化され、mRNA転写産物の生成が大幅に増加しました。

  • 体外での発現確認

キャップ付きmRNAを293T細胞にトランスフェクトし、標的タンパク質の発現を検出することができます。

  • RNaseの厳格な管理

実験環境や消耗品におけるRNaseの厳格な管理により、mRNAの分解が効果的に防止されています。

ケーススタディ

Yao Hai Bio-PharmaのmRNAプラットフォームは、完璧なキャピング反応プロセスを構築しています。

EGFP mRNAの場合、酵素によるキャピング処理が施されたmRNA前駆体を使用し、293T細胞に転染して24時間後に高いレベルでeGFP蛍光信号（緑色蛍光）を観察できます。これはWestern Blot (WB)で検出され、標的タンパク質である増強型緑色蛍光タンパク質（eGFP）が体外で効率的に発現されることを示しています。

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酵素キャピング処理されたeGFP mRNAの293T細胞における発現

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