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細胞ベースの効力アッセイ

細胞ベースの効力アッセイ

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IVT RNA

細胞ベースの効力アッセイ

MRNA効力アッセイの意義

MRNAワクチンと治療薬の急速な発展に伴い、生物学的活性（mRNAの翻訳効率に関連する）を定義するために特定の分析方法パネルが必要です。これらの方法は通常、細胞転染および標的タンパク質の機能アッセイに基づいています。

妖海バイオファーマは、mRNA医薬品またはLNP製品向けの細胞ベースの効力アッセイを提供しており、これには細胞転染（293T、HepG2、HeLa、K562、U937、Raw264.7細胞など）およびELISAまたはウェスタンブロット（WB）アッセイが含まれます。

効力アッセイに関する規制要件

WHOの規制に関する考慮事項によると、「最終ワクチンの各ロットの有効性は、適切な定量的かつ検証された機能的方法を使用して決定されるべきである。潜在的な体外有効性アッセイには、細胞ベースのトランスフェクションシステムまたは無細胞アッセイが含まれる可能性がある。」また、USPはmRNAの有効性をテストするために「細胞ベースのアッセイ」を推奨している。すなわち、ターゲットタンパク質の発現。

分析方法

分析

方法

有効性アッセイ

細胞ベースのトランスフェクションとターゲットタンパク質の同定：

293T、HepG2、HeLa、K562、U937、Raw264.7細胞など。

手続き

ステップ1. mRNAまたはmRNA-LNPによる細胞ベースのトランスフェクション

細胞を培養し、mRNAまたはmRNA-LNPでトランスフェクションする。詳細には、トランスフェクション試薬と混ぜたmRNAをトランスフェクションする一方で、mRNA-LNPは直接細胞にトランスフェクションされる。24〜48時間後、遠心分離により発現したタンパク質を含む上清を回収する。

ステップ2. ターゲットタンパク質の機能アッセイ

ターゲットタンパク質の機能的結合を評価するためにELISAまたはWBアッセイを行います。

ケーススタディ

MRNAサンプルの細胞ベース効力アッセイ

Yaohai-BioPharmaは、mRNA用の細胞ベース効力アッセイ法を開発しました。これは、細胞培養、細胞転染、タンパク質機能アッセイを含みます。私たちはeGFP mRNA、mCherry mRNA、ルシフェラーゼmRNA、スパイクタンパク質mRNAを293T細胞に転染し、蛍光、発光、または着色信号、WB、ELISAを通じて標的タンパク質を検出しました。

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Yaohai Bio-PharmaによるmRNA製品の細胞ベース効力アッセイ

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