כל הקטגוריות
ENEN
מכסת התעתוק משותף של mRNA

מכסת התעתוק משותף של mRNA

עמוד הבית >  IVT RNA  >  סינתזת RNA מותאמת אישית  >  סינתזת mRNA מותאמת אישית  >  מכסת התעתוק משותף של mRNA

IVT RNA

כיסוי mRNA Co-transcriptional

בהשוואה למכסה האנזימטי הדו-שלבי, שיטת התעתוק המשותפת של שלב אחד יכולה להפחית משמעותית את זרימת התהליך. השיטה מכוונת תוצאה וכוללת תוספת של אנלוגים מסוג cap לתגובת השעתוק החוץ גופית (IVT). ניתן להכניס אנלוגים של כובע בתחילת השעתוק, וניתן להשיג mRNA עם מבנה כובע עם השלמת השעתוק. אנלוגים נוכחיים של כובעים מהדור השלישי יכולים להימנע ממכסה הפוכה ולהוסיף ישירות את מבנה ה-Cap 1 למוצר התעתיק.

משיקולים של אימונוגניות mRNA in vivo ויעילות התרגום, תהליך ה-IVT מאמץ לעתים קרובות סוגים מסוימים של NTPs שונה, והנוקלאוטידים המותאמים הנפוצים הם פסאודורידין (Ψ), N1-מתיל-פסאודורי-דין (N1Ψ) ו-5-מתילציטוזין (5mC) .

לא מוגדר

לא מוגדר

איור: תרשים של תגובת mRNA Co-transscriptional ו-Capping

פרטי השירות

שֵׁרוּת

פרטי השירות

תקופת אספקה ​​(יום עבודה)

מכסה משותפת

תגובת תעתיק חוץ גופית (אנלוגי Clean Cap)1-2
שינויי נוקלאוטידים (Ψ/N1Ψ/5mC)
הסרת תבנית DNA (DNase I)

אופטימיזציה של מצב IVT - אופציונלי

עיצוב ואופטימיזציה של רכיבי תגובה3-7
התכונות שלנו
  • אסטרטגיות מגוונות לשינוי נוקלאוטידים

אסטרטגיות אופציונליות רבות לשינוי נוקלאוטידים יכולות לשפר את ביטוי החלבון.

  • מערכת תגובה אופטימלית

השג יחס תמלול גבוה ויעילות מכסה גבוהה.

  • תהליך כיסוי יציב

השג שיעור מכסה של יותר מ-95%.

  • בקרה מחמירה של RNase

מניעת פירוק mRNA ביעילות על ידי שליטה קפדנית של RNase בסביבת הניסוי ובחומרים מתכלים.

מקרה לדוגמה

Yaohai Bio-Pharma בנתה פלטפורמת תהליך מכסה משותפת בוגרת, תוך שימוש באנלוגי מכסה נקיים כדי להוסיף ישירות מבנה Cap1 תוך הימנעות מכסה הפוכה. לאחר טיפול מקדים בדגימה וזיהוי אלקטרופורזה נימית (CE), שיעור המכסים של mRNA של חלבון פלואורסצנטי מוגבר (eGFP) יכול להגיע ליותר מ-95%.

图片图片

יעילות מכסת eGFP mRNA של יותר מ-95%

eGFP mRNA ו-mCherry mRNA שהוכנו על ידי כיסוי תעתיק משותף עוברים תאי 293T, בהתאמה, ונצפה אות ניאון חזק לאחר 48 שעות, מה שמצביע על כך שה-mRNA מתבטא ביעילות בתאי 293T.

图片

ביטוי של eGFP mRNA ו-mCherry mRNA בתא 293T

קבל הצעת מחיר חינם

נהיה בקשר