mRNA מגביר עצמי (saRNA), הידוע גם בשם רפליקון RNA, מקודד לרצפי mRNA לתעתוק מבחנה (IVT) וגנים משוכפלים ויראליים שמקורם בנגיפים אלפא או flavivirus. גנים משוכפלים ויראליים מאפשרים הגברה עצמית של ה-mRNA, מה שגורם לביטוי חלבון מוגבר ולמינון מינימלי נדרש של RNA בהשוואה ל-mRNA שאינם מגבירים. היבט נוסף הוא ש-saRNA היא מולקולה גדולה יחסית (יותר מ-14 קילובייט).
Yaohai Bio-Pharma הקימה קבוצה של טכנולוגיות סינתזת mRNA כדי לספק mRNA שאינו מגביר ו-mRNA מגביר עצמי (1000 nt~14000 nt), כגון עיצוב ואופטימיזציה של רצף, IVT, טיהור, ליאופיליזציה וכוסות ננו-חלקיקי שומנים (LNP) . כל המוצרים משוחררים תחת תקני בקרת איכות מחמירים.
Fig.1 Structural Features of IVT mRNAs: Conventional, Circular and Self-amplifying mRNA.
The self-amplifying RNA comprises four non-structural proteins (designated as nsP1, nsP2, nsP3, and nsP4), which are derived from alphaviruses, Venezuelan equine encephalitis virus (VEEV). Among these, nsP1 exhibits dual enzymatic activities, namely GTase and N7MTase, whereas nsP2 possesses RTPase activity, pivotal for capping the IVT mRNA to generate Cap 0 structure. Additionally, nsP2 serves as a protease and helicase, facilitating the intricate processing of the entire nsP complex. The precise function of nsP3 remains elusive, yet it engages in interactions with diverse host cell proteins, thereby contributing to the attenuation of the antiviral response mounted by the host.
An alphavirus subgenomic promoter (SGP) region is located before the gene of interest (GOI). The SGP element facilitates the initiation of GOI transcription by bypassing the reading of the sequence encoding viral nsP proteins.
Fig.2 Synthesis and cell assays of eGFP saRNA of Yaohai Bio-Pharma RNASci Platform.
פרוטוקול הסינתזה של saRNA דומה ל-mRNA: סינתזת mRNA מותאמת אישית