mRNA מעגלי (circRNA) נמצא בשימוש נרחב בחקר תפקודי גנים או חלבונים. בינתיים, זה פופולרי בפיתוח של תרופות ביולוגיות מניעתיות וטיפוליות, בדומה ל-mRNA.
Yaohai Bio-Pharma הקימה קבוצה של טכנולוגיות סינתזת circRNA כדי לספק RNA באיכות גבוהה, כגון עיצוב ואופטימיזציה של רצפים, שעתוק חוץ גופית (IVT), מחזוריות/מחזוריות, טיהור, ואנקפסולציה של ננו-חלקיקים שומנים (LNP). כל המוצרים משוחררים תחת תקני בקרת האיכות המחמירים (QC).
בהשוואה ל-mRNA ליניארי, RNA מעגלי (circRNA) יציב יותר במבנה ומהווה נקודה חמה מרכזית במחקר הנוכחי של תרופות חומצות גרעין. יש לו מגוון רחב של יישומים בתחומים שונים, בין אם כ-circRNA מקודד ובין אם כ-circRNA ללא קידוד, כולל חיסונים מניעתיים למחלות זיהומיות, חיסונים אונקולוגיים טיפוליים, תרופות אונקולוגיות טיפוליות, טיפול תחליפי חלבון, רפואה רגנרטיבית, ריפוי תאים וגנטי (CGT) , תפקיד ספוג מולקולרי ו-RNA aptamer.
התַהֲלִיך | שירות אופציונלי | פרטי השירות | תקופת אספקה (יום) |
עיצוב ואופטימיזציה של רצף circRNA | עיצוב ואופטימיזציה של רצפי קידוד | אופטימיזציה של CDS Codon | 1 |
עיצוב ואופטימיזציה של רצפים ללא קידוד | Intron ו-Exon Sequence, עיצוב ואופטימיזציה של זרוע ורווח הומולוגי | 1-2 | |
הכנת פלסמיד מעגלית | סינתזת גנים | סינתזת גנים (צד שלישי) | 7-10 |
הגברה של פלסמיד | הגברה של פלסמיד | 2 | |
מיצוי פלסמיד | |||
הכנת פלסמיד לינארית | ליניאריזציה וטיהור פלסמיד | ליניאריזציה של פלסמיד | 1 |
ליניאריזציה טיהור DNA | |||
תמלול ומחזוריות במבחנה | תמלול ומחזוריות במבחנה | תגובות תמלול ומחזוריות במבחנה | 1-2 |
RNase R עיכול | |||
אופטימיזציה - אופציונלי | הרכב תגובה, אופטימיזציה של זמן | 2-5 | |
טיהור circRNA | שיטת טיהור קונבנציונלית | משקעי ליתיום כלוריד | 1 |
טיהור חרוז מגנטי | 1 | ||
טיהור circRNA טהור במיוחד | כרומטוגרפיה נוזלית הכנה עם ביצועים גבוהים (HPLC) | 1-2 | |
החלפת מאגר | אולטרה סינון | 1 | |
ליופיליזציה של circRNA | מילוי לדוגמא | מילוי | 2-3 |
ליאופיליזציה | הקפאה מוקדמת | ||
ייבוש ראשוני (סובלימציה) | |||
ייבוש משני (ספיגה) | |||
Encapsulation circRNA-LNP | Encapsulation LNP | טיפול מוקדם בחומרים ובנוזלים | 2 |
ערבוב התקנים מיקרופלואידיים | |||
החלפת מאגר | סינון זרימה טנגנטיאלית | 1 | |
לעקר | סִנוּן | ||
בקרת איכות של פלסמיד DNA | ריכוז/טוהר | ספקטרופוטומטריה אולטרה סגול (UV). | 1-2 |
מבנה פלסמיד | אגרוס ג'ל אלקטרופורזה (AGE) | ||
אלקטרופורזה נימית (CE)-אופציונלי | |||
זיהוי פלסמיד | זיהוי אנזימי הגבלה/AGE | ||
בקרת איכות של circRNA | ריכוז/טוהר | ספקטרופוטומטריה אולטרה סגול (UV). | - |
טוֹהַר | Agarose Gel Electrophoresis (AGE)/E-Gel | 0.5 | |
HPLC-אופציונלי | 1 | ||
בקרת איכות של circRNA-LNP | יעילות אנקפסולציה | שיטת ריבוגרין | 1 |
גודל חלקיק | פיזור אור דינמי (DLS) | 1 | |
אינדקס ריבוי פיזור | פיזור אור דינמי (DLS) | 1 | |
זיטה פוטנציאל | פיזור אור דינמי (DLS) | 1 | |
בדיקת עוצמה מבוססת תאים | העברת תאים | ציפוי תאים, טרנספקציה של תאים | 4 |
זיהוי חלבון מטרה | תצפית פלואורסצנציה, Western Blot/ELISA | 1-3 |
העברנו circRNA חלבון ניאון ירוק משופר (eGFP circRNA), mCherry circRNA, luciferase circRNA לתאי 293T, וזיהינו חלבון מטרה באמצעות קרינה, אות זוהר או צבע, כתם מערבי (WB), מבחן אימונוסורבנטי מקושר אנזים (ELISA).
מבחני כוח מבוססי תאים של דגימות circRNA מאת Yaohai Bio-Pharma