Yaohai Bio-Pharma מכינה circRNA על בסיס מערכת PIE (יישור של אקסונים ואינטרונים), המסתמכת על פונקציית השחבור העצמי של אינטרונים מסוג I להשגת מחזור RNA. מבנה PIE מתוכנן באמצעות הגן T4 td או גן מבשר tRNA fishy, והסידור הוא כדלקמן:
אינטררון ה-RNA ושבר האקסון התומך מחולקים לשני חלקים (טרמינל 5' ומסוף 3'), כאשר רצף הטרמינלי 5' מועבר לזנב של רצף המטרה, רצף ה-3 'המסוף מוחדר לקדמת רצף המטרה, ורצף גן המטרה מוחדר באמצע.
תחת הקטליזה של GTP, מבנה ה-PIE מוביל למחזוריות של רצפים שאינם אינטרונים. בשילוב עם אסטרטגיית שיפור סבירה של קצב מחזוריות, Yaohai Bio-Pharma יכולה להשיג מחזוריות של רצפים עד 4 kb עם קצב מחזור של יותר מ-80%.
איור 1. מחזור במבחנה של circRNA המבוסס על מערכת PIE
פרטי שירותים
| התַהֲלִיך | שירות אופציונלי | פרטי השירות | תקופת אספקה (יום עבודה) |
| עיצוב ואופטימיזציה של רצף circRNA | עיצוב ואופטימיזציה של רצפי קידוד | יישור רצף CDS אופטימיזציה של קודון CDS | 1 |
| עיצוב ואופטימיזציה של רצפים שאינם מקודדים | עיצוב ואופטימיזציה של רצף אינטרון ואקסון עיצוב ואופטימיזציה של רצף זרועות הומולוגיות עיצוב ואופטימיזציה של רצף מרווחים | 1-2 |
אסטרטגיות נפוצות לעיצוב רצף mRNA
| רכיבי CircRNA | פונקציות ביולוגיות | אסטרטגיות אופטימיזציה |
| רצפי אינטרונים ואקסונים דו-טרמינליים | שחבור עצמי של אינטררון מזורז עם GTP למחזוריות של רצפים מחוץ לאינטרון. | עוצב על פי הגן T4 td או גן מבשר tRNA שמן דגים. |
| סִמוּל | IRES | אתר זיהוי ריבוזום פנימי המווסת את התרגום של circRNA. | סקר של רצפי כניסה לאתר ריבוזום פנימי (IRES) ממקורות ויראליים שונים, למשל מקורות EMCV, CVB3. |
| CDS | אזורים מקודדי חלבון, רצפים המקודדים לאנטיגנים, נוגדנים או חלבונים פונקציונליים אחרים. | אופטימיזציה של קודון מגבירה את רמת התרגום; קודונים מסוימים שאינם אופטימליים עשויים למלא תפקיד בקיפול חלבון. |
| אי קידוד | רצפים לא מקודדים | מטרת miRNA או חלבונים להפעיל ויסות גנים או חלבונים. | מיקוד לאתרי קישור ספציפיים עבור miRNAs או חלבונים יכול לחזור על הרצפים של אתר הקישור. |
התכונות שלנו
- מערכת מחזור אופטימלית PIE שילוב עם אסטרטגיות אופטימיזציה סבירות להשגת שיעור מחזוריות של יותר מ-80%;
- צוות אופטימיזציית CDS מתקדם שיתוף פעולה עם צוות אלגוריתמי AI מקצועי להשלמת האופטימיזציה של קודונים באזור CDS;
- ניתן להשיג circRNA בתהליך בוגר ומושלם עם יעילות מחזורית גבוהה, יציבות גבוהה ויעילות תרגום גבוהה.
מקרה לדוגמה
Yaohai Bio-Pharma השיקה את מוצר הבקרה משופר חלבון פלואורסצנטי ירוק (eGFP) circRNA, המבוסס על מערכת PIE להשגת מחזוריות של RNA.
באמצעות מגיב טרנספקציה קונבנציונלי, eGFP circRNA עובר תאי 293T, וניתן לזהות אות ניאון eGFP (ירוק) לאחר 24 שעות, אשר יוגבר לאחר 48 שעות. עדיין ניתן לזהות את האות הפלורסנט ביום ה-7 וביום ה-14 לאחר מכן טרנספקציה.
אימות ביטוי במבחנה של eGFP circRNA
IW
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
לא
PL
PT
RO
RU
ES
SV
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
