בתהליך ההכנה של mRNA בתנאים חיצוניים (IVT), נדרש דרוש DNA פלזמיד מולרי כתבנית להעתקה IVT בעזרת פולימראז T7 RNA. DNA פלזמיד באיכות גבוהה הוא חיוני להעתקה בתנאים חיצוניים.
על בסיס הפלטפורמה המובילה של שירות הכנה של פלזמיד, יאוהאי ביופרמה מספקת שירות הכנה של DNA פלזמיד מולרי בפurity וסטנדרט גבוה כדי להשיג העתקה IVT יעילה.
תַהֲלִיך | שירות אופציונלית | פרטי שירות | תקופת מסירה (יום עבודה) |
הכנה של פלסמיד מעגלי | סינתזה גנונית | סינתזה של גן (של צד שלישי) | 7-10 |
הגדלת פלזמיד | הגדלת פלזמיד | 2 | |
הפרדת פלזמיד | |||
הכנה של פלזמיד ליניארי | ליניאריזציה וטהרה של פלסמיד | ליניאריזציה של פלזמיד | 1 |
טהור DNA לאחר ליניאריזציה | |||
בקרת איכות של DNA פלזמיד | עומס וטיהור | ספקטרופוטומטריה אולטרה-סגול (UV) | 1-2 |
צורת פלזמיד | אלקטרופורזה בגל אגרוז (AGE) | ||
אלקטרופורזיס קפילרית (CE) - אופציונלי | |||
היכרות עם פלזמיד | זיהוי אנזים הגבלה / AGE |
בחירה גמישה של שיטות ליניאריזציה
האצה של שיטות הוצאת DNA וטהרה כדי להשיג שיעורי תקלה גבוהים.
תקני בקרת תהליך חסכוניים, עם שיעור קונפורמציה סופרהלית של דגמי פלסמיד לחקר של יותר מ-80%.
שירותי הכנה וניהול איכות של פלסמידים ברמה גבוהה ואפקטיבית כדי לענות על צרכי ניסוי.
כדוגמה, ניקח את קטלוג mRNA_luciferase של יאוהאי ביואי-פארמה. דגם הפלסמיד תבנית הטרנסקריפציה (דרגת מחקר) כולל יותר מ-90% ספירלות עליה, קירוב של 100% ליניאריזציה, והיחס לאחר טרנסקריפציה מגיע עד ל-1:200 (DNA פלסמיד ליניארי:mRNA).
ה-mRNA_luciferase שנוצר באמצעות הפלסמיד הליניארי כטמפלט מתנפח לתאים 293T, ופעילות התגובה אנזימית-סובסטרט מוערכת 24 שעות לאחר ההתקשרות.
ניתן להבחין אות חזק מאוד של פעילות לוקיפראז, כלומר, חלבון לוקיפראז מוסת בהפקה יעילת, מה שמעיד כי טהרת התבנית הטרנסקריפציה יכולה להדגיש את דרישות ההכנה המהותית של mRNA באיכות גבוהה.
בדיקת יחס פלסמיד ספירלי
אימות ביטוי mRNA לוקיפראז בתנאים חלולים