בהשוואה למכסה האנזימטי הדו-שלבי, שיטת התעתוק המשותפת של שלב אחד יכולה להפחית משמעותית את זרימת התהליך. השיטה מכוונת תוצאה וכוללת תוספת של אנלוגים מסוג cap לתגובת השעתוק החוץ גופית (IVT). ניתן להכניס אנלוגים של כובע בתחילת השעתוק, וניתן להשיג mRNA עם מבנה כובע עם השלמת השעתוק. אנלוגים נוכחיים של כובעים מהדור השלישי יכולים להימנע ממכסה הפוכה ולהוסיף ישירות את מבנה ה-Cap 1 למוצר התעתיק.
משיקולים של אימונוגניות mRNA in vivo ויעילות התרגום, תהליך ה-IVT מאמץ לעתים קרובות סוגים מסוימים של NTPs שונה, והנוקלאוטידים המותאמים הנפוצים הם פסאודורידין (Ψ), N1-מתיל-פסאודורי-דין (N1Ψ) ו-5-מתילציטוזין (5mC) .
איור: תרשים של תגובת mRNA Co-transscriptional ו-Capping
פרטי השירות
שֵׁרוּת |
פרטי השירות |
תקופת אספקה (יום עבודה) |
מכסה משותפת |
תגובת תעתיק חוץ גופית (אנלוגי Clean Cap) |
1-2 |
| שינויי נוקלאוטידים (Ψ/N1Ψ/5mC) |
| הסרת תבנית DNA (DNase I) |
אופטימיזציה של מצב IVT - אופציונלי |
עיצוב ואופטימיזציה של רכיבי תגובה |
3-7 |
התכונות שלנו
- אסטרטגיות מגוונות לשינוי נוקלאוטידים
אסטרטגיות אופציונליות רבות לשינוי נוקלאוטידים יכולות לשפר את ביטוי החלבון.
השג יחס תמלול גבוה ויעילות מכסה גבוהה.
השג שיעור מכסה של יותר מ-95%.
מניעת פירוק mRNA ביעילות על ידי שליטה קפדנית של RNase בסביבת הניסוי ובחומרים מתכלים.
מקרה לדוגמה
Yaohai Bio-Pharma בנתה פלטפורמת תהליך מכסה משותפת בוגרת, תוך שימוש באנלוגי מכסה נקיים כדי להוסיף ישירות מבנה Cap1 תוך הימנעות מכסה הפוכה. לאחר טיפול מקדים בדגימה וזיהוי אלקטרופורזה נימית (CE), שיעור המכסים של mRNA של חלבון פלואורסצנטי מוגבר (eGFP) יכול להגיע ליותר מ-95%.
יעילות מכסת eGFP mRNA של יותר מ-95%
eGFP mRNA ו-mCherry mRNA שהוכנו על ידי כיסוי תעתיק משותף עוברים תאי 293T, בהתאמה, ונצפה אות ניאון חזק לאחר 48 שעות, מה שמצביע על כך שה-mRNA מתבטא ביעילות בתאי 293T.
ביטוי של eGFP mRNA ו-mCherry mRNA בתא 293T
IW
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
לא
PL
PT
RO
RU
ES
SV
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
