MRNA מתגבר העצמי (saRNA), הידוע גם כ-RNA רפליקון,^Kode מגדיר סדרות mRNA תランスקריפציה בת-מעבדה (IVT) וגנים של רפליקאז ויראלי המושכים מאלפאווירוס או פלאווירוסים. הגנים של הרפליקאז הויראלי מאפשרים את התגברות העצמית של mRNA, מה שגורם להגברה בביטוי חלבונים ובכך מפחית את הכמות הנחוצה של RNA בהשוואה ל-mRNAs שאינם מתגבריםים. אспект נוסף הוא שה-saRNA הוא מולקולה יחסית גדולה (יותר מ-14 קילו בסיס).
Yaohai Bio-Pharma יצרה קבוצה של טכנולוגיות סינתזה של mRNA כדי לספק mRNA ללא תרבות ו-mRNA עם תרבות עצמית (1000 nt~14000 nt), כמו תכנון ותיכנון של סדרות, IVT, טיהור, שימור בדrying ועטיפה בננופלטים שומניים (LNP). כל המוצרים מוצאים תחת תקן איכות חמור.
תרשים 1. תכונות מבניות של mRNAs בתהליך IVT: קונבנציונלי, מעגלי ו-mRNA עם תרבות עצמית.
ה-RNA העצמית המגדילה כוללת ארבעה חלבונים לא-סטרוקטורליים (שמוגדרים כ-nsP1, nsP2, nsP3 ו-nsP4), שמושקים מוירוסים אלפא, וריאס של סוס ונצואלי (VEEV). בין אלה, nsP1 מראה פעילות אנזימטית כפולה, שנקראת GTase ו-N7MTase, בעוד ש-nsP2 מחזיק בפעילות RTPase, שהיא קריטית לציפוי mRNA ה-IVT כדי ליצור את מבנה הקפ 0. בנוסף, nsP2 משמש כפרוטאז והליצאז, מה שמאפשר את עיבודו המורכב של כל מרוכב ה-nsP. הפונקציה המדויקת של nsP3 עדיין אינה ברורה, אך הוא משתתף בהדבקות עם חלבונים שונים של התא המארח, מה שתרם להחלשה של התגובה האנטי-וויראלית שהמארח מפעיל.
אזור המופעל תת-גנומי של אלפאווירוס (SGP) ממוקם לפני הגן של העניין (GOI). איבר ה-SGP מאפשר את תחילת ההעתקה של GOI על ידי חציית קריאת הסדרה המוצפנת לחלבוני ה-nsP הויראליים.
תמונה 2. סינתזה ובוחנים תאיים של eGFP saRNA של Yaohai Bio-Pharma RNASci Platform.
הפרוטוקול של סינתזה של saRNA דומה לזה של mRNA: סינתזה מותאמת של mRNA