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Purification de circRNA par HPLC

L'ARN circulaire, ou circRNA, est un type spécifique d'ARN qui a une forme différente. Alors que l'ARN normal a une apparence linéaire et droite, l'ARN circulaire est en boucle. Les circRNAs - un type dont la structure est cruciale car ils se révèlent généralement abondants et participent à de nombreux processus cellulaires importants. D'une part, ils régulent la façon dont nos gènes sont exprimés, ce qui peut influencer tout, des schémas de croissance de notre corps à la façon dont nous réagissons à la maladie. Les circRNAs intéressent beaucoup les scientifiques ; une meilleure compréhension d'eux peut révéler comment les maladies se développent et identifier de nouvelles approches thérapeutiques. Mais il y a un problème : les circRNAs sont très petits et ont tendance à être présents en très faible quantité dans les échantillons étudiés par les scientifiques. Il est donc difficile de récolter suffisamment de circRNA pour la recherche.

Avant que les bases définitives de la collecte de circRNA ne soient établies, une méthode bien établie appelée chromatographie liquide à haute performance, ou HPLC en abrégé, était utilisée. La HPLC est une technique polyvalente utilisée pour séparer diverses molécules en fonction de leurs caractéristiques physiques et chimiques. Elle fonctionne en séparant les molécules en fonction de leur taille et de leur forme. Comme les circRNA sont très petits, ils peuvent facilement être perdus parmi les milliers d'autres molécules d'un échantillon. Cela signifie que les circRNA peuvent être séparés des autres ARN, protéines et débris exogènes qui peuvent avoir été inclus dans l'échantillon en utilisant des méthodes efficaces telles que la chromatographie d'exclusion de taille (SEC), une technique HPLC. Il s'agit d'une séparation importante pour les scientifiques qui doivent isoler le circRNA pour leurs recherches.

Isolement de circRNA par HPLC pour une analyse précise en aval

Une fois que la HPLC a aidé à la purification du circRNA, il doit être analysé en profondeur par les scientifiques pour comprendre ses fonctions dans notre organisme. Les circRNA sont apparus comme des molécules importantes impliquées dans de multiples fonctions biologiques, ce qui rend une compréhension approfondie des différents types et rôles de circRNA essentielle pour déchiffrer leur implication dans diverses maladies. Les scientifiques ne connaissent pas la séquence du circRNA purifié et devront la connaître pour découvrir les fonctions de ces rôles. Pour cela, ils utilisent des techniques telles que la PCR à transcription inverse (RT-PCR). Avec la RT-PCR, les scientifiques font des copies supplémentaires du circRNA afin de pouvoir l'étudier plus spécifiquement. Elles sont souvent instructives, fournissant des informations sur le fonctionnement de ces molécules et ce qu'elles font dans nos cellules, en analysant les séquences de circRNA.

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