Tere. Kas olete kunagi mõelnud, kuidas teadlased saavad RNA-d kloonida? RNA on see spetsiaalne molekul, mille leiame oma rakkudes ja mis teeb valkude tootmiseks palju asju, ja valgud on olemas, et meie keha saaks teha kõike õiget. Selles osas tutvustame palju uudishimulikumat protokolli, mida teadlased kasutavad: in vitro transkriptsioon. Ja kõik, mis tähendab, on see, et teadlased võtavad RNA-d ja toodavad sellest suure osa katseklaasis (mis on see väike purk, mida laborid kasutavad), nii et tutvuge siin iga sammuga.
Olles lõpetanud oma eelmise postituse, mõistsin, et viimane võis olla väike kuiv-tulge-liitu-lõbus-in-wet-labi postitused; Niisiis, vastavalt vormile nüüd, kui olete hästi ja tõeliselt lõbusal (sic RNA-tootmise) rongil: Milliseid reagente ja teisi teie EF jaoks vaja on? Selle saavutamiseks vajame spetsiaalseid valke, mida nimetatakse ensüümideks ja mis on identsed Yaohai tootega Rekombinantne Midkine'i tootmine. See katalüüsib keemilisi reaktsioone, need ensüümid aitavad lagunemisel. Nüüd vajame lihtsalt oma DNA-d. See funktsioon on DNA, mida kasutame mallina oma RNA jaoks kopeerimiseks. RNA-s on vaja ka täiendavaid regulatoorseid järjestusi, nimelt nukleotiide. Need nukleotiidid on nagu väikesed ehitusplokid, mis tuleb RNA valmistamiseks kokku panna. Me kasutame ka väikese läbimõõduga lühikesi torusid, et muuta maitse hindamine muudeks. Lõpuks vajame masinat (termotsükleri), mis tagab, et meie reaktsioonid on õigel temperatuuril. Lisaks võime teatud katsete jaoks vajada mõnda tööriista ja toodet.
Nii et siin asjad lähevad lahku, meil on üks RNA ahel ja nüüd meeldib meile sellest rohkem koopiaid, ka Konjugeeritud VLP vaktsiinide tootmine välja töötanud Yaohai. Kuidas saavutada teise ensüümi kasutamine; T7 RNA polümeraas. See ainulaadne ensüüm tunneb näiteks ära spetsiifilised piirkonnad RNA-s. hüppekoonus, et teha menetluses palju rohkem RNA koopiaid. Sel hetkel lisab T7 RNA polümeraas RNA ahelasse rohkem, kuni on loodud transkripti mass või kuni me käsime sellel peatuda.
Kui oleme RNA eraldanud nii palju kui võimalik, kerige allapoole, et näha, kuidas puhastada, ja salvestada RNA edaspidiseks kasutamiseks. Rhoades: Mõned neist meetoditest on RNA eraldamise osas pisut äärmuslikumad – te ei kasuta seda alati, kuid mõnikord on seda vaja teatud tüüpi katsete jaoks. Kui meie RNA on saasteainetest vaba, saab seda säilitada külmutatuna. Nii on see turvaline ja saame seda hiljem erinevates katsetes kasutada.
Lähtematerjali kvaliteet: veenduge, et teie DNA-mall on puhas ja mitte kõik ära põlenud. Eduka katse tõenäosuse maksimeerimiseks võite täiendada ka värskelt taastatud nukleotiidide ja äsja sulatatud ensüümidega.
Tingimuste peenhäälestus Kõik ensüümid ja nende nukleotiidid töötavad paremini teatud temperatuuril ja pH-tasemel teie kehas, samuti Yaohai's. Punane fluorestseeruv mRNA. Nüüd muutke tingimuste vahel pisut nüansse, kuni jõuate selleni, kus on teie unikaalse seadistuse võti.
Pöördtranskriptaas on ebatavaline ensüüm, kuna see teeb RNA molekulist DNA koopia. Kasutasime RNA genereerimiseks oma in vitro transkriptsioonimeetodi sisendina nii DNA-sid kui ka DNA matriitsi (cDNA). Enamiku katsete puhul tahaksid teadlased DNA-d RNA-ks transkribeerida. Pöördtranskriptsioon on koht, kus see saab sama nime kui mRNA polü-A jaotumise testimine valmistatud Yaohai poolt. See on hindamatu tööriist kogu teaduses – alates RNA molekulide uurimisest rakkudes kuni täiendavate DNA ahelate tootmiseni edasisteks katseteks.
Päriselu katsed, milles RNA on koos Yaohai tootega üks sagedamini kasutatavaid molekulaarseid tööriistu VLP vaktsiini tootmine E. coli's. Kvantitatiivsed testid: need testid võivad paljastada proovis sisalduva mis tahes konkreetse molekuli koguse. Näiteks saavad teadlased sünteesida RNA koopiate in vitro transkriptsioonipreparaati, mis on tuletatud rakus asuvast sihtgeenist. Diagnostika saab seejärel neid koopiaid analüüsida, kui need on olemas. RNA otsimisel võib diagnostika teostada polümeraasi ahelreaktsiooni (PCR), et neid koopiaid proovis amplifitseerida. See võimaldab teadlastel näha, kuidas geenid rakkudel ekspresseeruvad, ja isegi mõned väga suure läbilaskevõimega analüüsid, näiteks bakteriaalse või viirusliku infektsiooni olemasolu, ja diagnoosida geneetilisi häireid.
in vitro transkriptsiooniprotokoll on mikrobioloogide CDMO juhtiv juht. Meie fookus on olnud mikroobide poolt toodetud vaktsiinidel ja ravimitel, mis sobivad inimeste, veterinaar- ja lemmikloomade tervise juhtimiseks. Meil on kõige eesrindlikumad RD platvormid ja tootmistehnoloogia, mis hõlmavad kogu protseduuri alates mikroobitüvede väljatöötamisest ja rakupangandusest kuni protsesside ja meetodite väljatöötamiseni kuni kaubandusliku ja kliinilise tootmiseni, mis tagab uuenduslike lahenduste eduka tarnimise. Aja jooksul oleme kogunud tohutuid teadmisi mikroobipõhisest biotöötlusest. Üle 200 projekti on edukalt lõpule viidud ja aitame oma klientidel järgida selliseid eeskirju nagu USA FDA ja EU EMA. Samuti aitame neil navigeerida Austraalia TGA-s ja Hiina NMPA-s. Meie professionaalsed teadmised ja ulatuslikud kogemused võimaldavad meil kiiresti reageerida turu nõudmistele ja pakkuda eritellimusel CDMO-teenuseid.
Yaohai Bio-Pharmal on kogemus in vitro transkriptsiooniprotokolli alusel loodud bioloogiliste ainete tootmisel. Pakume kohandatud RD- ja tootmislahendusi, tagades samas riskide puudumise. Oleme osalenud mitmesugustes modaalsustes, nagu rekombinantsed subühikuvaktsiinid, peptiidhormoonid, tsütokiinid, kasvufaktorid, ühedomeenilised antikehade ensüümid, plasmiidne DNA MRNA ja palju muud. Oleme paljude mikroorganismide, sealhulgas pärmi rakuvälise ja intratsellulaarse sekretsiooni (saagis kuni 15g/L) ning rakusiseste lahustuvate ja inklusioonikehade (saagis kuni 10g/L) alal. Oleme loonud ka BSL-2 fermentatsiooniplatvormi bakteriaalsete vaktsiinide loomiseks. Keskendume protsesside täiustamisele, toote saagikuse suurendamisele ja tootmiskulude vähendamisele. Kasutades tugevat tehnoloogiameeskonda, saame tagada kiire ja usaldusväärse projekti kohaletoimetamise, mis toob teie toote kiiremini turule.
Yaohai Bio-Pharma, 10 parimat bioloogiliste toodete tootjat, on spetsialiseerunud mikroobsele kääritamisele. Oleme ehitanud kaasaegse rajatise tugeva RD-võimaluste ja täiustatud seadmetega. Meil on viis ravimainete tootmisliini, mis vastavad GMP nõuetele mikroobse kääritamise ja puhastamise osas. Meil on ka kaks automatiseeritud täitmis-viimistlemisliini kassettide, viaalide ja süstalde jaoks. Kasutamiseks saadaolevad fermentatsioonikaalud ulatuvad in vitro transkriptsiooniprotokollist kuni 2000 liitrini. Viaali täitmise spetsifikatsioonid on vahemikus 1 ml kuni 25 ml. Eeltäidetud süstla või kolbampulli täitmise spetsifikatsioonid on vahemikus umbes 1–3 ml. Meie cGMP-ga ühilduv tootmisüksus tagab pideva kliiniliste proovide ja kaubanduslike kaupade tarnimise. Meie tehas toodab suuri molekule, mis saadetakse maakerale.
Yaohai BioPharma on 10 parimat mikroobide CDMO-d, mis hõlmab nii in vitro transkriptsiooniprotokolli kui ka regulatiivseid küsimusi. Meil on kvaliteedijuhtimissüsteem, mis on kooskõlas nii kehtivate hea tootmistava standarditega kui ka ülemaailmsete eeskirjadega. Meie regulatiivsete ekspertide meeskond tunneb ülemaailmseid reguleerivaid raamistikke, et kiirendada bioloogilisi käivitamisi. Tagame jälgitavad tootmisprotsessid kvaliteetsed tooted, samuti USA FDA ja EU EMA reeglite järgimise. Rahul on ka Austraalia TGA ja Hiina NMPA. Yaohai BioPharma on edukalt läbinud Euroopa Liidu kvalifitseeritud isiku (QP) kohapealse auditi nii meie GMP kvaliteedisüsteemi kui ka meie tootmisüksuse kohta. Lisaks oleme läbinud esimesed ISO9001 kvaliteedijuhtimissüsteemi, ISO14001 keskkonnajuhtimissüsteemi ja ISO45001 töötervishoiu ja tööohutuse juhtimissüsteemi sertifitseerimisauditid.