El ARN circular, o circRNA, es un tipo específico de ARN que tiene una forma diferente. Mientras que el ARN normal tiene una apariencia lineal y recta, el circRNA tiene forma de bucle. Los circRNA son un tipo cuya estructura es crucial porque suelen ser abundantes y participar en muchos procesos celulares importantes. Por un lado, regulan la forma en que se expresan nuestros genes, lo que puede influir en todo, desde los patrones de crecimiento de nuestro cuerpo hasta cómo respondemos a las enfermedades. Los circRNA son de gran interés para los científicos; una mejor comprensión de ellos puede revelar cómo se desarrollan las enfermedades e identificar nuevos enfoques terapéuticos. Pero hay un problema: los circRNA son muy pequeños y tienden a estar presentes en cantidades muy bajas en las muestras que estudian los científicos. Esto hace que sea difícil recolectar suficiente circRNA para la investigación.
Antes de que se establecieran las bases definitivas para recolectar el ARN circular, se utilizaba un método bien establecido llamado cromatografía líquida de alto rendimiento, o HPLC, por sus siglas en inglés. La HPLC es una técnica versátil que se utiliza para separar varias moléculas según sus características físicas y químicas. Funciona separando las moléculas en función de su tamaño y forma. Debido a que los ARN circulares son muy pequeños, pueden perderse fácilmente entre las miles de otras moléculas de una muestra. Esto significa que los ARN circulares se pueden separar de otros ARN, proteínas y desechos exógenos que puedan haberse incluido en la muestra mediante el uso de métodos efectivos como la cromatografía de exclusión por tamaño (SEC), una técnica de HPLC. Es una separación importante para los científicos que necesitan aislar el ARN circular para su investigación.
Una vez que la HPLC ayuda a purificar el circRNA, los científicos deben analizarlo a fondo para comprender sus funciones en nosotros. Los circRNA surgieron como moléculas importantes que participan en múltiples funciones biológicas, por lo que es fundamental comprender en profundidad los diversos tipos y funciones de circRNA para descifrar su participación en diversas enfermedades. Los científicos no conocen la secuencia del circRNA purificado y necesitarán conocerla para descubrir las funciones de estas funciones. Para ello, utilizan técnicas como la PCR con transcripción inversa (RT-PCR). Con la RT-PCR, los científicos hacen copias adicionales del circRNA para poder estudiarlo de forma más específica. A menudo son informativas, ya que proporcionan información sobre cómo funcionan estas moléculas y qué hacen en nuestras células, mediante el análisis de las secuencias de circRNA.
Los investigadores necesitan recuperar todo el circRNA que puedan conseguir. Los circRNA solo están disponibles en pequeñas cantidades en muestras biológicas, y la HPLC puede ser útil para separar y recolectar una mayor cantidad de estas moléculas críticas. Por lo tanto, los investigadores tienen una mayor probabilidad de obtener suficiente circRNA para sus experimentos y generar hallazgos prácticos. Cuanto más circRNA puedan recolectar, más funciones y roles podrán conocer en la salud y la enfermedad.
Los métodos de extracción de ARN circular de materiales biológicos complejos suelen ser costosos (por ejemplo, la ultrafiltración), tediosos y propensos a la contaminación. Obtener el ARN circular sin perder nada suele requerir una manipulación cuidadosa y varios pasos. Aquí es donde la HPLC resulta realmente útil. Los métodos de HPLC pueden hacer que el proceso de extracción sea más rápido y eficaz. Al reducir los pasos de extracción, la HPLC también minimiza la posible pérdida de muestras valiosas. Este método cuidadoso produce datos más fiables y ayuda a garantizar que el ARN circular aislado sea lo más puro posible.
Los circRNA son muy difíciles de estudiar y es necesario que los científicos sean extremadamente precisos en su identificación y medición. Basándose en este factor, la HPLC no solo es un paso clave para eliminar otros contaminantes, sino que también garantiza que solo se puedan aislar moléculas de circRNA, lo que mejora la especificidad y la sensibilidad de la detección de circRNA. Esto da como resultado una muestra más limpia, lo cual es importante para la precisión de la investigación. Tener una muestra purificada de circRNA ayuda a los científicos a tener más confianza en sus resultados y a tener menos posibilidades de cometer errores en sus estudios.
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