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Purificación de circRNA basada en HPLC

El ARN circular, o circRNA, es un tipo específico de ARN que tiene una forma diferente. Mientras que el ARN normal tiene una apariencia lineal y recta, el circRNA tiene forma de bucle. Los circRNA son un tipo cuya estructura es crucial porque suelen ser abundantes y participar en muchos procesos celulares importantes. Por un lado, regulan la forma en que se expresan nuestros genes, lo que puede influir en todo, desde los patrones de crecimiento de nuestro cuerpo hasta cómo respondemos a las enfermedades. Los circRNA son de gran interés para los científicos; una mejor comprensión de ellos puede revelar cómo se desarrollan las enfermedades e identificar nuevos enfoques terapéuticos. Pero hay un problema: los circRNA son muy pequeños y tienden a estar presentes en cantidades muy bajas en las muestras que estudian los científicos. Esto hace que sea difícil recolectar suficiente circRNA para la investigación.

Antes de que se establecieran las bases definitivas para recolectar el ARN circular, se utilizaba un método bien establecido llamado cromatografía líquida de alto rendimiento, o HPLC, por sus siglas en inglés. La HPLC es una técnica versátil que se utiliza para separar varias moléculas según sus características físicas y químicas. Funciona separando las moléculas en función de su tamaño y forma. Debido a que los ARN circulares son muy pequeños, pueden perderse fácilmente entre las miles de otras moléculas de una muestra. Esto significa que los ARN circulares se pueden separar de otros ARN, proteínas y desechos exógenos que puedan haberse incluido en la muestra mediante el uso de métodos efectivos como la cromatografía de exclusión por tamaño (SEC), una técnica de HPLC. Es una separación importante para los científicos que necesitan aislar el ARN circular para su investigación.

Aislamiento de circRNA basado en HPLC para un análisis posterior preciso

Una vez que la HPLC ayuda a purificar el circRNA, los científicos deben analizarlo a fondo para comprender sus funciones en nosotros. Los circRNA surgieron como moléculas importantes que participan en múltiples funciones biológicas, por lo que es fundamental comprender en profundidad los diversos tipos y funciones de circRNA para descifrar su participación en diversas enfermedades. Los científicos no conocen la secuencia del circRNA purificado y necesitarán conocerla para descubrir las funciones de estas funciones. Para ello, utilizan técnicas como la PCR con transcripción inversa (RT-PCR). Con la RT-PCR, los científicos hacen copias adicionales del circRNA para poder estudiarlo de forma más específica. A menudo son informativas, ya que proporcionan información sobre cómo funcionan estas moléculas y qué hacen en nuestras células, mediante el análisis de las secuencias de circRNA.

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