Determinación del peso molecular por LC-MS
El peso molecular intacto siempre ha sido reconocido como una característica importante de los productos biológicos. El análisis del peso molecular intacto se utiliza para demostrar los productos de proteínas/péptidos y verificar los productos biológicos. La medición del peso molecular es un requisito de las directrices reglamentarias.
Yaohai Bio-Pharma ofrece análisis de peso molecular intacto en condiciones nativas, reducidas y N-desglicosiladas. Empleamos cromatografía líquida-espectrometría de masas (LC-MS) para determinar el peso molecular intacto.
Requisitos reglamentarios para el peso molecular
En la ICH Q6 se recomienda que “el peso (o tamaño) molecular se determine mediante cromatografía de exclusión por tamaño, electroforesis en gel de poliacrilamida-SDS (en condiciones reductoras y no reductoras), espectrometría de masas (MS) y otras técnicas apropiadas”.
Métodos analíticos
| ECONOMÉTRICOS |
Métodos |
| Peso molecular |
LC-MS/cromatografía líquida/espectrometría de masas por electropulverización (LC/ES-MS) de proteínas o subunidades nativas, reducidas y N-desglicosiladas |
Procedimientos analíticos
Peso molecular intacto:
- Realización de LC-MS en la muestra nativa tal como se recibió.
- Análisis de datos LC-MS.
Peso molecular reducido:
- Tratar la muestra de proteína con un agente reductor adecuado;
- Realizar LC-MS en la proteína reducida;
- Análisis de datos LC-MS.
Peso molecular N-desglicosilado:
- Eliminar los N-glicanos con una enzima adecuada;
- Realizar LC-MS en la proteína N-desglicosilada;
- Análisis de datos LC-MS.
Peso Molecular Reducido y N-desglicosilado:
- Tratar la muestra de proteína con un agente reductor adecuado;
- Eliminar los N-glicanos con una enzima adecuada;
- Realización de LC-MS en proteína reducida y N-desglicosilada;
- Análisis de datos LC-MS.
Peso molecular de la subunidad de proteína:
- Escisión de subunidades
- Realización de LC-MS en subunidades de proteínas
- Análisis de datos LC-MS
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