El perfil de N-glicanos es esencial para la producción de productos biofarmacéuticos. Yaohai Bio-Pharma proporciona un servicio de elaboración de perfiles de N-glicanos mediante cromatografía líquida-espectrometría de masas (LC-MS) de glicanos liberados y marcados. Los pasos generales para preparar una muestra de N-glicanos incluyen la digestión de la glicoproteína (GP), la desglicosilación, la purificación, el marcaje/derivatización y la extracción en fase sólida (SPE).
Hemos estado involucrados en la caracterización estructural de proteínas de varias moléculas grandes, incluidas vacunas de subunidades recombinantes, nanocuerpos/VHH/anticuerpos de dominio único (sdAb), fragmentos de anticuerpos, hormonas/péptidos, citocinas, factores de crecimiento (GF), enzimas, colágenos. etc.
Requisitos reglamentarios para el perfilado de N-glicanos
Según la directriz ICH Q6B, “para las glicoproteínas, se determina el contenido de carbohidratos (azúcares neutros, aminoazúcares y ácidos siálicos). Además, se analizan en la medida de lo posible la estructura de las cadenas de carbohidratos, el patrón de oligosacáridos (perfil de antena) y los sitios de glicosilación de la cadena polipeptídica.
Método analítico
| ECONOMÉTRICOS |
Métodos |
| Perfil de N-glicano |
Análisis por cromatografía líquida-espectrometría de masas (LC-MS) de glicanos liberados y marcados |
Procedimientos
1. Liberación enzimática de glucanos con péptido N-glucosidasa F (PNGase F)
2. Derivatización de glicanos liberados por 2-aminobenzamida (2-AB)
3. Purificación de los N-glicanos recolectados en una columna TSK Amide - 80 si hay presentes grandes cantidades de detergentes, sales no volátiles o materiales con grupos amino libres.
4. Etiquetado por 2-aminobenzamida fluorescente (2-AB)
5. Análisis LC-MS de N-glicanos marcados
6. Análisis de los datos
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