Las proteínas recombinantes a menudo experimentan la oxidación de las cadenas laterales de aminoácidos expuestas, como el triptófano (Trp) y la metionina (Met), cambiando las propiedades fisicoquímicas de las proteínas. Estos cambios pueden, a su vez, contribuir a alterar las funciones biológicas de las proteínas afectadas, como pérdida de unión, reducción de la actividad enzimática y eliminación inesperadamente rápida. Las proteínas son objetivos importantes para las reacciones oxidativas porque reaccionan rápidamente con los oxidantes y abundan en las células, los tejidos extracelulares y los fluidos corporales.
Por lo tanto, controlar la oxidación de proteínas es fundamental para el éxito del desarrollo biofarmacéutico.
Yaohai Bio-Pharma ofrece un servicio de análisis de oxidación de aminoácidos, que le permite determinar la oxidación de aminoácidos mediante cromatografía líquida-espectrometría de masas (LC-MS).
Hemos estado involucrados en la caracterización estructural de proteínas de varias moléculas grandes, incluidas vacunas de subunidades recombinantes, nanocuerpos/VHH/anticuerpos de dominio único (sdAb), fragmentos de anticuerpos, hormonas/péptidos, citocinas, factores de crecimiento (GF), enzimas, colágenos. etc.
Requisitos reglamentarios para la oxidación de aminoácidos
Según las directrices ICH Q6B, las formas oxidadas pueden detectarse y caracterizarse mediante cromatografía, electroforética y/u otros métodos analíticos relevantes (p. ej., cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC), electroforesis capilar, espectroscopia de masas, dicroísmo circular).
Métodos analíticos
| ECONOMÉTRICOS |
Métodos |
| Oxidación de aminoácidos |
LC-MS, cromatografía líquida de alta resolución de fase reversa (RP-HPLC) o cromatografía de interacción hidrófoba Cromatografía líquida de alta resolución (HIC-HPLC) y espectrometría de masas |
Procedimientos analíticos
1. Preparación de muestras
2. CL-EM
3. Análisis de los datos
Los residuos de triptófano (Trp) son especialmente propensos a la oxidación debido a la alta reactividad del indol aromático con especies reactivas de oxígeno. La oxidación de Trp requiere cierta exposición de los residuos de Trp que normalmente están enterrados en la estructura tridimensional de la proteína.
Sin embargo, cuando los residuos de Trp se oxidan, pueden transformarse en una variedad de productos con propiedades muy diferentes a las del Trp original. La vía más común para la oxidación de Trp incluye la formación de N-formilquinurenina (diferencia de masa: +32).
Otro aminoácido comúnmente oxidado es la metionina. El átomo de azufre en el residuo de Met puede aceptar uno o dos átomos de oxígeno, lo que conduce a la formación de sulfóxido (diferencia de masa: +16) o sulfona (diferencia de masa: +32), respectivamente. Esta modificación es relativamente común debido a la típicamente alta exposición superficial del Met.
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