El perfilado de N-glicanos es esencial para la producción de biofármacos. Yaohai Bio-Pharma ofrece el servicio de perfilado de N-glicanos utilizando Cromatografía Líquida-Espectrometría de Masas (LC-MS) de glicanos liberados y etiquetados. Los pasos generales para preparar una muestra de N-glicanos incluyen la digestión de la proteína glicosilada (GP), desglicosilación, purificación, etiquetado/derivatización y Extracción en Fase Sólida (SPE).
Hemos estado involucrados en la Caracterización Estructural de Proteínas de varias grandes moléculas, incluidas Vacunas Recombinantes de Subunidades, Nanocuerpos/VHHs/ Antibodies de Dominio Único (sdAbs), Fragmentos de Antibody, Hormonas/Péptidos, Citocinas, Factores de Crecimiento (GF), Enzimas, Colágenos, etc.
Requisitos Regulatorios para el Perfilado de N-Glicanos
De acuerdo con la directriz ICH Q6B, “para las glicoproteínas, se determina el contenido de carbohidratos (azúcares neutrales, azúcares aminados y ácidos siálicos). Además, se analiza la estructura de las cadenas de carbohidratos, el patrón de oligosacáridos (perfil antenado) y los sitios de glicosilación de la cadena polipeptídica en la medida de lo posible.
Método Analítico
| Análisis |
Métodos |
| Perfilado de N-glicanos |
Análisis por Cromatografía Líquida-Espectrometría de Masas (LC-MS) de glicanos liberados y etiquetados |
Procedimientos
1. Liberación glicánica enzimática con Peptide N-Glycosidase F (PNGase F)
2. Derivatización de glicanos liberados mediante 2-aminobenzamida (2-AB)
3. Purificación de los N-glicanos cosechados en una columna TSK Amide - 80 si están presentes grandes cantidades de detergentes, sales no volátiles o materiales con grupos aminados libres
4. Etiquetado con 2-aminobenzamida (2-AB) fluorescente
5. Análisis LC-MS de N-glicanos etiquetados
6. ¿Qué es? Análisis de datos
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
