Las proteínas recombinantes a menudo ven la oxidación de los grupos laterales de los aminoácidos expuestos, como el triptófano (Trp) y la metionina (Met), lo que cambia las propiedades físico-químicas de las proteínas. Estos cambios pueden, a su vez, contribuir a alterar las funciones biológicas de las proteínas afectadas, como la pérdida de unión, reducción de la actividad enzimática, o una eliminación inesperadamente rápida. Las proteínas son objetivos importantes para las reacciones oxidativas porque reaccionan rápidamente con los oxidantes y son abundantes en las células, tejidos extracelulares y fluidos corporales.
Por lo tanto, monitorear la oxidación de proteínas es crucial para el desarrollo exitoso de bioproductos farmacéuticos.
Yaohai Bio-Pharma ofrece servicios de análisis de oxidación de aminoácidos, lo que le permite determinar la oxidación de aminoácidos mediante Cromatografía Líquida-Espectrometría de Masas (LC-MS).
Hemos estado involucrados en la Caracterización Estructural de Proteínas de varias moléculas grandes, incluidas Vacunas de Subunidades Recombinantes, Nanocuerpos/ VHHs/ Antibodies de Dominio Único (sdAbs), Fragmentos de Antibody, Hormonas/Peptídeos, Citocinas, Factores de Crecimiento (GF), Enzimas, Colágenos, etc.
Requisitos Regulatorios para la Oxidación de Aminoácidos
De acuerdo con las directrices ICH Q6B, las formas oxidadas pueden ser detectadas y caracterizadas mediante métodos cromatográficos, electroforéticos y/u otros métodos analíticos relevantes (por ejemplo, Cromatografía Líquida de Alto Rendimiento (HPLC), electroforesis capilar, espectrometría de masas, dicromismo circular).
Métodos Analíticos
| Análisis |
Métodos |
| Oxidación de Ácidos Aminados |
LC-MS, Cromatografía Líquida de Alto Rendimiento en Fase Inversa (RP-HPLC) o Cromatografía Líquida de Alto Rendimiento por Interacción Hidrofóbica (HIC-HPLC) y espectrometría de masas |
Procedimientos Analíticos
1. Preparación de la Muestra
2. LC-MS
3. Análisis de datos
Los residuos de triptófano (Trp) son especialmente propensos a la oxidación debido a la alta reactividad del anillo aromático indol con especies reactivas de oxígeno. La oxidación de Trp requiere cierta exposición de los residuos de Trp que normalmente están enterrados en la estructura tridimensional de la proteína.
Sin embargo, cuando los residuos de Trp se oxidan, pueden transformarse en una variedad de productos con propiedades muy diferentes al Trp original. La vía más común para la oxidación de Trp incluye la formación de N-formilkynurenina (Diferencia de masa: +32).
Otro aminoácido comúnmente oxidado es la metionina. El átomo de azufre en el residuo de Met puede aceptar uno o dos átomos de oxígeno, lo que lleva a la formación de sulfoxido (Diferencia de masa: +16) o sulfona (Diferencia de masa: +32), respectivamente. Esta modificación es relativamente común debido a la típicamente alta exposición superficial de Met.
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