Заняцце сайтаў N-гліказілявання з'яўляецца фізіялагічнай асаблівасцю глікапратэінаў і ў асноўным вырабляе N-глікан. Служба аналізу занятасці сайтаў N-гліказілявання Yaohai Bio-Pharma праводзіцца шляхам пераварвання, вызвалення, узбагачэння і аналізу з дапамогай вадкаснай храматаграфіі-электрараспыляльнай іанізуючай мас-спектраметрыі-мас-спектраметрыі (LC-ESI-MS/MS).
Мы ўдзельнічалі ў структурнай характарыстыкі бялку розных вялікіх малекул, у тым ліку рэкамбінантных субадзінак вакцын, нанацелаў/VHH/аднадоменных антыцелаў (sdAbs), фрагментаў антыцелаў, гармонаў/пептыдаў, цітакінаў, фактараў росту (GF), ферментаў, калагенаў, г.д.
Нарматыўныя патрабаванні да занятасці сайтаў N-гліказілявання
Згодна з рэкамендацыямі ICH Q6B, «для глікапратэінаў вызначаецца ўтрыманне вугляводаў (нейтральных цукроў, амінацукроў і сіялавых кіслот). Акрамя таго, у максімальна магчымай ступені аналізуюцца структура вугляводных ланцугоў, алігацукрыдны малюнак (вусікавы профіль) і сайт(ы) гліказілявання поліпептыднага ланцуга».
Аналітычны метад
| Аналіз |
Методыка |
| Заняцце сайта N-гліказілявання |
ВХ-МС пасля расшчаплення дэгліказілазай і пратэазамі |
Працэдуры
1. Расшчапленне бялкоў для атрымання невялікіх пептыдных фрагментаў.
2. Вызваленне N-глікана з выкарыстаннем эндагліказідазы H або PNGase F. Эндагліказідаза H разрывае сувязь паміж двума рэшткамі GlcNAc у ядры N-звязаных гліканаў, у той час як PNGase F з'яўляецца глікаамідазай, якая разрывае сувязь паміж GlcNAc і Asn, вызваляючы ўвесь цукровы ланцуг і ператварэнне Asn у Asp з павелічэннем масы на 1-Da.
3. Узбагачэнне N-глікапептыдам з дапамогай HILIC (вадкасная храматаграфія гідрафільнага ўзаемадзеяння)
4. Аналіз занятасці сайтаў N-звязанага гліказілявання з дапамогай LC-ESI-MS/MS.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
НЕ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
