Рэкамбінантныя вавёркі часта бачаць акісленне адкрытых бакавых ланцугоў амінакіслот, такіх як трыптафан (Trp) і метыёнін (Met), змяняючы фізіка-хімічныя ўласцівасці бялкоў. Гэтыя змены могуць у сваю чаргу спрыяць змене біялагічных функцый здзіўленых бялкоў, такіх як страта звязвання, зніжэнне ферментатыўнай актыўнасці, нечакана хуткі кліранс. Вавёркі з'яўляюцца важнымі мішэнямі для акісляльных рэакцый, таму што яны хутка рэагуюць з акісляльнікамі і ў вялікай колькасці ўтрымліваюцца ў клетках, пазаклеткавых тканінах і вадкасцях арганізма.
Такім чынам, маніторынг акіслення бялку мае вырашальнае значэнне для паспяховай біяфармацэўтычнай распрацоўкі.
Yaohai Bio-Pharma прапануе паслугу аналізу акіслення амінакіслот, якая дазваляе вызначыць акісленне амінакіслот метадам вадкаснай храматаграфіі-мас-спектраметрыі (LC-MS).
Мы ўдзельнічалі ў структурнай характарыстыкі бялкоў розных вялікіх малекул, у тым ліку рэкамбінантных субадзінак вакцын, нанацелаў/ VHH/ аднадаменных антыцелаў (sdAbs), фрагментаў антыцелаў, гармонаў/пептыдаў, цітакінаў, фактараў росту (GF), ферментаў, калагенаў, г.д.
Нарматыўныя патрабаванні да акіслення амінакіслот
Згодна з рэкамендацыямі ICH Q6B, акісленыя формы можна выявіць і ахарактарызаваць з дапамогай храматаграфічных, электрафарэтычных і/або іншых адпаведных аналітычных метадаў (напрыклад, высокаэфектыўнай вадкаснай храматаграфіі (ВЭЖХ), капілярнага электрафарэзу, мас-спектраскапіі, кругавога дыхраізму).
Аналітычныя метады
| Аналіз |
Методыка |
| Акісленне амінакіслот |
ВХ-МС, высокаэфектыўная вадкасная храматаграфія са зваротнай фазай (RP-HPLC) або высокаэфектыўная вадкасная храматаграфія гідрафобнага ўзаемадзеяння (HIC-HPLC) і мас-спектраметрыя |
Аналітычныя працэдуры
1. Падрыхтоўка пробы
2. ВХ-МС
3. аналіз дадзеных
Рэшткі трыптафану (Trp) асабліва схільныя да акіслення з-за высокай рэакцыйнай здольнасці араматычнага індолу з актыўнымі формамі кіслароду. Акісленне Trp патрабуе некаторага ўздзеяння рэшткаў Trp, якія звычайна пахаваны ў трохмернай структуры бялку.
Аднак, калі рэшткі Trp акісляюцца, яны могуць ператварацца ў розныя прадукты з вельмі рознымі ўласцівасцямі ад зыходнага Trp. Найбольш распаўсюджаны шлях акіслення Trp ўключае ў сябе адукацыю N-формилкинуренина (розніца мас: +32).
Яшчэ адна часта акісляецца амінакіслата - метионин. Атам серы ў астатку Met можа прымаць адзін або два атамы кіслароду, што прыводзіць да адукацыі сульфаксіду (розніца мас: +16) або сульфону (розніца мас: +32), адпаведна. Гэтая мадыфікацыя адносна распаўсюджаная з-за звычайна высокай экспазіцыі паверхні Met.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
НЕ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
