У рекамбінацыйных белках часта ўбачваецца выцягванне адкрытых баковых ланцугоў амінокіслот, такіх як трыптафан (Trp) і метыонін (Met), што змяняе фізікальна-хімічныя ўласцівасці белкаў. Ці пераварэнні могуць, у сваю чаргу, прывясті да змены біягалагічных функцый пошкоджаных белкаў, такіх як вяратае спаданне сілы пазначэння, зніжэнне анзыматычнай актыўнасці, неспадзявана швидкае выметанне. Белкі — галоўныя мэты для аксыдацыйных реакцый, бо яны шырока реагуюць з аксідантамі і ў значнай колькасці налічаюцца ў клетках, замежных тканях і тэлаўных рознаў.
Таму няабходнасць маніторынга белкаўага выцягвання крытычная для паспеху развіцця біяфармацеўтычных працэсав.
Yaohai Bio-Pharma прапановвае сервіс аналізу выцягвання амінокіслот, які дазваляе вам вызначыць выцягванне амінокіслот за дапамогай Жидкаснай Хроматографіі-Мас-Спектраметры (LC-MS).
Мы ўдзельнічалі ў даследванні структуры белкаў розных вялікіх молекулаў, уключна Рекамбінантных Пададзеленых Вакцын, Нанатэлаў / VHHs / Адзінавых антагенаў (sdAbs), Узломкіў Антагенаў, Гормонаў/Пептыдаў, Цытайнаў, Фактараў Росту (GF), Энзымоў, Колагенаў і т.д.
Рэгламентныя патрабаванні да адксідацыі амінавых кіслін
За настаўнікам ICH Q6B, адксідованыя формы могуць быць выявленыя і характарызаваныя хроматографічнымі, електрафарэтычнымі і/або іншымі рэляўантнымі аналітычнымі метадамі (напрыклад, Высокая Эфектыўная Жыдкая Хроматографія (HPLC), капілярная електрафарэз, мас-спектраскопія, цыркуляцыйнае дыхрэзма).
Аналітычныя метады
| Аналіз |
Метады |
| Аксідацыя амінокіслот |
LC-MS, Жыдкая Хроматографія Выsoкaй Эфектыўнасці з Аваротнай Фазай (RP-HPLC) ці Хроматографія Выsoкaй Эфектыўнасці з Гідрофобным Взаемадзеяннем (HIC-HPLC) і мас-спектраметрыя |
Аналітычныя Працэдуры
1. Падготовка пробы
2. LC-MS
3. Аналіз дадзеных
Рэзіду Трiptофану (Trp) звычайна падлежат аksідацыі ў звяzanні з высокай рэакцыйнасцю ароматачнага індала з рэакцыйнымі вытварэннямі кислороду. Аксідацыя Trp пацягвае за сабой частковую экспазіцыю рэзідза Trp, якія звычайна знаходзяцца ў скрытым стане ў трымаразмернай структуры белка.
Аднак, калі рэзіды Trp аксідуюць, яны можа пераўтварацца ў шырокі спектр вытварэнняў, якія маюць дужа адмінную ўласцівасці ад початковага Trp. Найбуйнейшы шлях для аксідацыі Trp уключае фармаванне N-формілкірурыніну (Разніца масы: +32).
Іншым часткам аксідуючым амінаным кіслінам з'яўляецца метіонін. Сурмацый атам у рэзідзе Met можа прымаць абодва адзінку ці двое кислародаў, што прыводзіць да фармавання сульфоксиду (Разніца масы: +16) ці сульфону (Разніца масы: +32), адпаведна. Гэтая модыфікацыя досычна частая, у звязку з высоцкім узроўнем экспазіцыі Met на паверхні.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
