Yukarı Yönde Süreç Geliştirme

Mikrobiyal CDMO

Yukarı Yönde Süreç Geliştirmenin Önemi

Fermantasyon işlemi olarak da bilinen yukarı akış işlemi (USP), yukarı akış biyoişlemenin ilk aşamalarından biridir. Mikrobiyal fermantasyon süreci, biyolojik verimi ve maliyeti doğrudan etkileyen yüksek yoğunluklu hücre kültürü ve eksojen gen ekspresyonu için çok önemlidir.

Biyolojik gelişmenin ilk aşamalarında (klinik öncesi veya faz 1/2), odak noktası, orta düzeyde verime sahip, ölçeklenebilir, hayvan içermeyen süreçler geliştirmek ve tüm ürün kalite standartlarını karşılamaktır.

Son aşamalarda (3. aşama veya ticari) verim, sağlamlık, ölçeklenebilirlik ve tekrarlanabilirliğe odaklanarak uygun maliyetli bir süreç oluşturacağız. Bu konuları ele alan faaliyetler süreç karakterizasyonu ve süreç doğrulama çalışmalarıdır. Bu arada, tasarım yoluyla kalite (QbD) ve deney tasarımı (DoE) araçları genellikle uygulanır.

Anahtar Kelimeler: süreç geliştirme, optimizasyon ve doğrulama, fermantasyon süreci, mikrobiyal hücre fermantasyonu, bakteri fermantasyonu, maya fermantasyonu, yüksek yoğunluklu fermantasyon, tasarlanmış suş fermantasyonu

Uygulama: Biyofarmasötik endüstrisi, insan ilacı, hayvan ilacı, aşı, rekombinant büyük molekül biyolojikleri, rekombinant biyolojikler, biyolojik reaktif

Yaohai Bio-Pharma'nın USP Çözümleri

10 yılı aşkın mikrobiyal fermantasyon deneyiminden yararlanan Yaohai Bio-Pharma, fermantasyon süreci zorluklarını çözmeye yardımcı olacak uzmanlığa sahiptir. Yüksek yoğunluklu fermantasyon stratejilerini hızla oluşturabiliriz. Escherichia coli (E.coli) periplazmik sekresyon, hücre içi çözünür veya inklüzyon cisimciği ekspresyonu ve Mayanın hücre dışı veya hücre içi ekspresyonu.

Mevcut genel fermantasyon geliştirme hizmetlerimiz şunları içerir:

Beslemeli kesikli modda 7L'lik küçük bir ölçekte gerçekleştirilen fermantasyon proses tasarımı
7L fermentörlerde üç partili proses doğrulaması
30L/70L'ye kadar bir ara proses ölçeği

İstenilen verimi veya oranı karşılamak için Tek Seferlik Bir Faktör (OTAF) veya Deney Tasarımı (DoE) kullanarak çok parametreli optimizasyonu esnek bir şekilde gerçekleştirebiliriz.

Temel fermantasyon parametreleri aşağıdaki gibi listelenmiştir:

Hayvan içermeyen fermantasyon ortamı bileşimleri

Antibiyotiksiz veya değil, İnokulum hacmi

Büyüme sıcaklığı, pH, Çözünmüş oksijen (DO) seviyesi

Besleme modu (örneğin, toplu besleme)

İndükleyici konsantrasyonu (örn. IPTG, metanol), İndüksiyon noktası (hücre ıslak ağırlığı/OD600),

İndüksiyon sıcaklığı, İndüksiyon süresi

vb.

Servis Detayları

Hizmetler	Süreç akışı
Çalkalama Şişesinde Yetiştirme(500 mL)	Hayvansız ortam hazırlama → Mikrobiyal tohum yetiştirme → Çalkalayıcıda yetiştirme → İndüksiyon → Hasat
Fermentörde Yetiştirme(7 L)	Hayvansız ortam hazırlama → Mikrobiyal tohumun yetiştirilmesi → 7L biyoreaktörde yüksek yoğunluklu hücre fermantasyonu → İndüksiyon → Hasat
Proteinlerin/Peptitlerin Kalite Kontrolü	Ön Muamele Hücre içi çözünür ekspresyon: Mikrobiyal hücrelerin toplanması ve yeniden süspansiyonu → Ultrasonik kırma → Hücre döküntülerinin uzaklaştırılması → Ham ekstrakt İnklüzyon cisimciği ekspresyonu: Mikrobiyal hücrelerin toplanması ve yeniden süspansiyonu → Ultrasonik kırma → inklüzyon gövdesi hazırlığı → Ham ekstrakt Hücre dışı çözünür ekspresyon: Kültür süpernatanının toplanması → Konsantrasyon ve tampon değişim → Ham ekstrakt Kalite analizi Örnek olarak ham ekstrakt → SDS PAGE veya Western blotlama (WB) ile hedef protein analizi
Plazmitlerin Kalite Kontrolü	Ön Muamele ve Kalite AnaliziPlazmid ekstraksiyonu → Agaroz jel elektroforezi ile DNA analizi

Örnek olay

Hedef polipeptit hormon verimini 8 g/L'den 10 g/L'ye çıkarmak için müşterimiz tarafından görevlendirildik.

DoE araçlarındaki Tam Faktöriyel Tasarım ve Yanıt Yüzey Tasarımını temel alarak temel fermantasyon parametrelerini hızlı bir şekilde tanıdık ve optimize ettik. Optimize edilmiş yüksek hücre yoğunluklu fermantasyon işlemi altında ekspresyon seviyesi 10 g/L'ye yükseldi.

Deneyimlerimiz

Çeşitli mikrobiyal konak türleri üzerinde çalıştık, örneğin: E.coli DH5a, TOP10, Trans10, BL21; Pichia pastoris (P. pastoris) SMD1168H, X-33, GS115, PichiaPink suşu1/2/3/4; Saccharomyces cerevisiae (S. cerevisiae) ve Hansenula polymorpha (H. polymorpha).
konusunda tecrübeliyiz E. coli periplazmik sekresyon, çözünebilir ve inklüzyon cisimciği ekspresyonunun yanı sıra Maya hücre içi veya hücre dışı ekspresyonu. İnklüzyon gövdesinin verimi 10 g/L'ye kadar çıkarken, çözünür protein verimi 0.5 ila 15 g/L arasında değişir.
Rekombinant alt birim aşılar, virüs benzeri parçacıklar (VLP'ler), hormonlar (insülin, GLP-1, büyüme hormonu), sitokinler (İnterlökin-2/IL-2, IL) dahil olmak üzere çeşitli büyük moleküllerin geliştirilmesinde ve üretiminde yer aldık. -15, IL-21), büyüme faktörleri (EGF, FGF, NGF), nanokorlar/tek alanlı antikorlar (sdAb'ler), enzimler vb.
Ekipman

7L*16 Fermantasyon Sistemi

Cedex Bio Analizörü, Biyoproses analizörü

Tüm Kategoriler

Yukarı Yönde Süreç Geliştirme

Mikrobiyal CDMO