Rekombinant proteinler sıklıkla triptofan (Trp) ve metiyonin (Met) gibi açıkta kalan amino asit yan zincirlerinin oksidasyonuna uğrayarak proteinlerin fizikokimyasal özelliklerini değiştirir. Bu değişiklikler, etkilenen proteinlerin bağlanma kaybı, enzimatik aktivitenin azalması, beklenmedik derecede hızlı temizlenme gibi biyolojik fonksiyonlarının değişmesine katkıda bulunabilir. Proteinler oksidatif reaksiyonlar için önemli hedeflerdir çünkü oksidanlarla hızlı reaksiyona girerler ve hücrelerde, hücre dışı dokularda ve vücut sıvılarında bol miktarda bulunurlar.
Bu nedenle, protein oksidasyonunun izlenmesi başarılı biyofarmasötik geliştirme için kritik öneme sahiptir.
Yaohai Bio-Pharma, Sıvı Kromatografi-Kütle Spektrometrisi (LC-MS) ile amino asit oksidasyonunu belirlemenize olanak tanıyan amino asit oksidasyon analiz hizmeti sunmaktadır.
Rekombinant Alt Birim Aşılar, Nanokorlar/VHH'ler/ Tek alanlı antikorlar (sdAb'ler), Antikor Parçaları, Hormonlar/Peptitler, Sitokinler, Büyüme Faktörleri (GF), Enzimler, Kollajenler dahil olmak üzere çeşitli büyük moleküllerin Protein Yapısal Karakterizasyonunda yer aldık. vesaire.
Amino Asit Oksidasyonuna İlişkin Düzenleyici Gereksinimler
ICH Q6B yönergelerine göre oksitlenmiş formlar, kromatografik, elektroforetik ve/veya diğer ilgili analitik yöntemlerle (örneğin, Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografisi (HPLC), kılcal elektroforez, kütle spektroskopisi, dairesel dikroizm) tespit edilebilir ve karakterize edilebilir.
Analitik metodlar
| Analiz |
Yöntemler |
| Amino Asit Oksidasyonu |
LC-MS, Ters Fazlı Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografisi (RP-HPLC) veya Hidrofobik Etkileşim Kromatografisi Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografisi (HIC-HPLC) ve kütle spektrometrisi |
Analitik prosedürler
1. Numune hazırlama
2.LC-MS
3. Veri analizi
Aromatik indolün reaktif oksijen türleri ile yüksek reaktivitesi nedeniyle triptofan (Trp) kalıntıları oksidasyona özellikle yatkındır. Trp oksidasyonu, normalde proteinin üç boyutlu yapısında gömülü olan Trp kalıntılarının bir miktar açığa çıkmasını gerektirir.
Ancak Trp kalıntıları oksitlendiğinde orijinal Trp'den çok farklı özelliklere sahip çeşitli ürünlere dönüşebilirler. Trp oksidasyonunun en yaygın yolu, N-formilkinurenin oluşumunu içerir (Kütle farkı: +32).
Yaygın olarak oksitlenen bir diğer amino asit ise metiyonindir. Met kalıntısındaki kükürt atomu, sırasıyla sülfoksit (Kütle farkı: +16) veya sülfon (Kütle farkı: +32) oluşumuna yol açan bir veya iki oksijen atomunu kabul edebilir. Bu modifikasyon, Met'in tipik olarak yüksek yüzey maruziyeti nedeniyle nispeten yaygındır.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
YOK HAYIR
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
