N-glykanların profili, biyofarmasötiklerin üretiminde temel bir öneme sahiptir. Yaohai Bio-Pharma, serbest bırakılan ve işaretlenmiş glykanlar için Sıvı Kromatografi-Mass Spektrometri (LC-MS) kullanarak N-glykan profili oluşturma hizmeti sunmaktadır. N-glykan örneği hazırlamak için genel adımlar, glikoproteini (GP) sindirme, de-glikozilasyon, temizleme, etiketleme/türevleştirme ve Katı Faz Ekstraksiyonu (SPE) içermektedir.
Çeşitli büyük moleküllerin Protein Yapısal Karakterizasyonu konusunda çalıştık, bunların arasında Rekombinant Alt Birim Aşılar, Nanovüçgenler/VHH'ler/ Tek-domän Antikorlar (sdAbs), Antikor Parçaları, Hormonlar/Peptidler, Sito kinler, Büyüme Faktörleri (GF), Enzimler, Kolajenler vb. bulunur.
N-Glykan Profil Oluşturma İçin Düzenleyici Gereksinimler
ICH Q6B rehberine göre, "glikoproteinler için karbonhidrat içeriği (nötr şekerler, amino şekilleri ve sialik asitler) belirlenir. Ayrıca, karbonhidrat zincirleri yapısı, oligosakkarit deseni (anten profili) ve polipeptid zincirinin glikozilasyon sitesi(leri) mümkün olan ölçüde analiz edilir.
Analitik Yöntem
| Analiz |
Yöntemler |
| N-glikan Profillemesi |
Serbest bırakılan ve etiketlenmiş glikanların Sıvı Kromatografi-Mass Spektrometri (LC-MS) analizi |
İşlemler
1. Enzimatik glikan serbest bırakımı Peptide N-Glikozidaz F (PNGase F) ile
2. Serbest bırakılan glikanların 2-aminobenzamid (2-AB) ile türevleştirilmesi
3. Büyük miktarda deterjan, volatil olmayan tuzlar veya özgür amino grupları içeren maddeler varsa toplanan N-glikanların TSK Amide - 80 sütunu üzerinde arındırılması
4. Fluoresan 2-aminobenzamid (2-AB) ile etiketleme
5. Etiketlenmiş N-glikanların LC-MS analizi
6. Veri analizi
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
