Yeniden yapılanmış proteinlerde, tryptofan (Trp) ve metionin (Met) gibi açığa çıkmış amino asit yan zincirlerinin oksidasyonu sıklıkla görülür ve bu da proteinlerin fizikokimyasal özelliklerini değiştirir. Bu değişiklikler, etkilenen proteinlerin biyolojik fonksiyonlarını değiştirmeye katkıda bulunabilir; örneğin bağlanma kaybı, enzimatik aktivitenin azalması, beklenmedik şekilde hızlı temizlenme vb. Proteinler, hücrelerde, ekshücreli dokularda ve vücut sıvılarında bol miktarda bulunarak oksidantlarla hızlı bir şekilde reaksiyon gösterdikleri için oksidatif tepkimeler için önemli hedeflerdir.
Bu nedenle, protein oksidasyonunu izlemek, başarılı biyofarmaseytik geliştirme açısından kritik importance taşır.
Yaohai Bio-Pharma, Sıvı Kromatografi-Mass Spektrometri (LC-MS) kullanılarak amino asit oksidasyonunu belirlemenizi sağlayacak amino asit oksidasyon analizi hizmeti sunmaktadır.
Çeşitli büyük moleküllerin Protein Yapısal Karakterizasyonu ile ilgili çalışmalara katıldık, bunların arasında Recombinant Subunit Aşılar, Nanovücutlar / VHHs / Tek-etken antibodi (sdAbs), Antibodi Parçaları, Hormonlar/Peptidler, Sito kinler, Büyüme Faktörleri (GF), Enzimler, Kollajenler vb. bulunur.
Amino Asit Oksidasyonu İçin Düzenleyici Gereksinimler
ICH Q6B rehberine göre, oksitlenmiş formlar kromatografik, elektroforetik ve/veya diğer ilgili analitik yöntemlerle (örneğin, Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografi (HPLC), kapilyer elektroforез, kütle spektrometrі, dairesel dişroizm) tespit edilebilir ve karakterize edilebilir.
Analitik Yöntemler
| Analiz |
Yöntemler |
| Amino Asit Oksidasyonu |
LC-MS, Ters Faz Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografi (RP-HPLC) veya Hydrofob Etkileşim Kromatografi Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografi (HIC-HPLC) ve kütle spektrometresi |
Analitik Prosedürler
1. Örnek Hazırlama
2. LC-MS
3. Veri analizi
Tryptofan (Trp) kalıntıları, aromatik indolun reaktif oksijen türleriyle yüksek reaktivitesi nedeniyle özellikle oksidasyona eğilimlidir. Trp oksidasyonu, genellikle proteinin üç boyutlu yapısında gizli olan Trp kalıntılarının bazı derecede maruz kalması gerektir.
Ancak, Trp kalıntıları oksidasyona uğradığında, orijinal Trp'ten çok farklı özelliklere sahip çeşitli ürünler haline gelebilirler. Trp oksidasyonunun en yaygın yolu, N-formilkürenin (Kütle farkı: +32) oluşumunu içerir.
Başka bir yaygın olarak oksidasyona uğrayan amino asit metionindir. Met kalıntılarındaki kükürt atomu, bir veya iki oksijen atomu kabul edebilir ve bu da sırasıyla sulfoxit (Kütle farkı: +16) veya sülfon (Kütle farkı: +32) oluşumuyla sonuçlanır. Bu değişiklik, Met'in tipik olarak yüksek yüzey maruziyeti nedeniyle göreceli olarak yayg
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
