Proizvodnja rekombinantnih beljakovin: z inženirstvom pridobljeni sevi E. coli

Escherichia coli (E. coli) je igrala pomembno vlogo pri proizvodnji rekombinantnih proteinov v biofarmacevtski industriji in je služila kot prvi ekspresijski vektor za proizvodnjo bioloških zdravil. E. coli se med drugimi prednostmi ponaša s hitro rastjo, priročno genetsko manipulacijo in hitro sintezo rekombinantnih proteinov. Zaradi obsežnih modifikacij je E. coli postala optimalna izbira za izražanje beljakovin, kar je pripeljalo do oblikovanja različnih z inženirstvom izdelanih sevov E. coli.

Yaohai Bio-Pharma je specializirana za zagotavljanje storitev zunanjega izvajanja na enem mestu za fermentacijo, čiščenje, razvoj postopka formulacije in proizvodnjo serije biofarmacevtskih izdelkov z uporabo ekspresijskih sistemov E. coli. Glede na obsežne izkušnje podjetja Yaohai smo povzeli, da se za proizvodnjo rekombinantnih beljakovin uporabljajo štirje običajni sevi E. coli in njihove značilnosti.

BL 21 sev

Sev BL21, ki izhaja iz linije E. coli B, nima proteaze Lon in proteaze zunanje membrane OmpT. Lon proteaza razgrajuje predvsem eksogene proteine, medtem ko OmpT razgrajuje predvsem proteine ​​zunajceličnega matriksa. Odsotnost teh dveh ključnih proteaz lahko učinkovito prepreči razgradnjo rekombinantnih proteinov.

Origami sev

Sev Origami, derivat E. coli K-12, ima mutacije v tioredoksin reduktazi in glutation reduktazi, ki olajšata tvorbo pravilno zvitih proteinov, ki vsebujejo disulfidne vezi in povečajo topnost proteinov. Sev Origami, vključno z Origami, Origami 2 in Origami B, je primeren za izražanje aktivnih proteinov, ki vsebujejo disulfidne vezi.

Shuffle sev

Sev SHuffle konstitutivno izraža izomerazo disulfidne vezi DsbC v citoplazmi, kar spodbuja tvorbo pravilnih disulfidnih vezi v oksidiranih proteinih. Služi tudi kot molekularni spremljevalec za zvijanje beljakovin in pomaga pri oblikovanju pravilne konformacije.

Sev Rosetta

Sev Rosetta dopolnjuje E. coli s tRNA, ki ustrezajo redkim kodonom, s ciljem izboljšati raven izražanja eksogenih genov, zlasti evkariontskih genov, v prokariontskih sistemih. Izpeljan iz BL21 in nosi plazmid pRARE, odporen na kloramfenikol, dopolnjuje šest tRNA, ki ustrezajo redkim kodonom (AUA, AGG, AGA, CUA, CCC in GGA), ki jih prvotno ni bilo v E. coli, in zagotavlja bolj "univerzalno" izražanje beljakovin.

zaključek

Trije glavni dejavniki za uspešno proizvodnjo rekombinantnih proteinov so pogoji gostitelja, vektorja in kulture. Na podlagi razumevanja fizikalno-kemijskih lastnosti rekombinantnega proteina, edinstvenih prednosti vsakega seva in posebnih potreb poskusa je treba izbrati najprimernejšega gostitelja. Poleg tega je treba optimizirati dejavnike, kot so plazmidni vektorji, temperatura in induktorji, da se poveča izražanje beljakovin.

Yaohai Bio-Pharma prav tako aktivno išče institucionalne ali individualne globalne partnerje in ponuja najbolj konkurenčno nadomestilo v industriji. Če imate kakršna koli vprašanja, nas kontaktirajte: [email protected]