Proizvodni postopek eGFP mRNA

Proizvodnja mRNA eGFP (Enhanced Green Fluorescent Protein) vključuje vrsto tehnik molekularne biologije za izdelavo funkcionalne RNA molekule, ki kodira za izraz eGFP. V področju mRNA eGFP je Yaohai Bio-Pharma zbirala obsežno izkušnjo pri izpolnjevanju posebnih potreb strank. S pomočjo naše izkušnje smo sintetizirali procesno toko za proizvodnjo mRNA EGFP.

1. Kloniranje gena eGFP : Da pridobite genski zaporedje, ki kodira za eGFP. Ta gen se tipično klonira iz obstoječega plazmidnega vektorja ali sintetično sintetizira na podlagi znane nukleotidske zaporednosti. Klonirani gen se nato preveri s posploševanjem, da se zagotovi točnost.
2. Optimizacija gena za izraz : Za optimalno izrazitev v cilnem sistemu (npr. v mamilijskih celicah, bakterijah ali v sistemih za transkripcijo in vitro) se gen eGFP lahko kodonsko optimizira. To vključuje zamenjavo redkejših kodonov v izvirnem zaporedju s pogosteje uporabljjenimi v gostiteljski organizmi, kar poveča verjetnost učinkovite prevedbe.
3. V laboratoriju Priprava predloge za transkripcijo : Ko je optimiziran gen pripravljen, se vgrabi v primerno vektor, pogosto plazmid, ki vsebuje regulacijske elemente, potrebne za transkripcijo (npr. zaporedje promotorja). Ta plazmid služi kot predloga za transkripcijo in vitro.
4. V laboratoriju Transkripcija : S pripravljeno plazmidno predložko se izvaja transkripcija v testnu cevico za sintezo eGFP mRNA. Ta proces vključuje uporabo enzimov RNA polimeraze, ki prepoznavajo promotorjično zaporedje in zagonijo transkripcijo, s katero nastane komplementarna vrstica RNA do DNA predloge. Odvisno od željene uporabe je mRNA lahko opremljena z kapom, poliadenilirana in/ali spremenjena za povečanje stabilnosti in učinkovitosti prevoda.
5. Čiščenje in kakovostni nadzor : Sintetizirana eGFP mRNA se nato čisti, da se odstranijo vse onesnaževalce, vključno s DNA, proteini in svobodnimi nukleotidi. Metode čiščenja lahko vključujejo gel elektroforezo, stolpec hromatografije ali ločitev na osnovi točk. Po čiščenju se mRNA analizira glede na kakovost, vključno z koncentracijo, čistoščino in celovitostjo, z uporabo tehnik kot so UV-Vis spektrofotometrija in gel elektroforeza.
6. Shranjevanje in dostava : Očiščena eGFP mRNA se tipično hranita pri nizkih temperaturah, da se ohrani stabilnost. Za poskusne namene se mRNA lahko vnaša v celice z različnimi metodami, vključno s elektroporacijo, lipefekcijo ali viralnimi vektorji, odvisno od določene uporabe in vrste ciljnih celic.
7. Izraz in potrditev : Ko je mRNA eGFP notri v celici, se prevede v povečano zeleno fluorescenčno beljakavino, ki jo je mogoče opazovati z fluorescenčno mikroskopijo. To omogoča potrditev uspešne proizvodnje mRNA, njene dostave in izraza.

V kratki, proizvodnja mRNA eGFP vsebuje kloniranje gene, optimizacijo za izraz, pripravo transkripcije v vitro, izvedbo transkripcijske reakcije, očiščevanje rezultirajoče mRNA in končno jo vnaša v celice za izraz in potrditev.

Prav tako aktivno iščemo globalne partnerje, institucije ali posameznike. Ponujamo največje naknadne plačilo v industriji. Če imate katere koli vprašanja, nas prosimo, da nas svobodno kontaktirate: [email protected]