Inovativne montažne tehnike za masovno sintezo genov

Tehnologija sestavljanja za sintezo velikih DNK fragmentov od ničla je temelj sinteze genov, vsebuje pa tudi metode, kot so BioBrick™, TAR, BglBrick, Golden Gate, Gibsonovo sestavljanje, CPEC in Overlap PCR. Zaradi omejitev trenutne tehnologije pri točni sintezi DNK genovske dolžine v enem koraku je potrebno združiti in vitro in in vivo sestavljalske tehnike za sestavo oligonukleotidskih fragmentov, sintetiziranih v segmentih, v dolge DNK fragmente.

In vitro sestavljalske tehnike

Klasificirane so v različne metode glede na velikost fragmenta in lastnosti zaporedja, pri čemer je skupna zahteva uporabe orodnih enzimov. Overlap PCR, ki temelji na metodi DNA polimeraze, je preprost in hitro izvajljiv. Metodi BioBrick in BglBrick, ki se osredotočijo na isoschizomere, omogočata standardizirano sestavljanje, čeprav je metoda BioBrick neustrežna za fuzijske proteine. Golden Gate kloniranje, ki temelji na vrsti IIS omejujočih enzimov, omogoča učinkovito brezrezno ligacijo večih fragmentov. Gibsonska metoda sestavljanja, ki uporablja kombinacijo več orodnih enzimov, omogoča brezrezno ligacijo z velikostjo fragmentov do več stotin kb. Standardiziran oblikovanje DNS komponent poveča uporabnost obstoječih fragmentov.

Tehnike sestavljanja v vivo

Čeprav v laboratoriju sestavljeni fragmenti lahko dosežejo velikost do več stotin kb, vendar je iznos pogosto neprikladnejši, kar zahteva pomnoževanje z organizmi, kot so Escherichia coli. Pri sestavljanju odlomkov, ki presegajo 20 kb, so pogosto uporabljane rekombinacijske sisteme znotraj organizmov, vključno s Bacillus subtilis, kvasi in inženirsko spremenjenimi bakterijami. Kvas je kot pogosto uporabljen gostitelj leta po letu priznan za svojo učinkovito sposobnost homologne rekombinacije. Lahko se uporablja za sestavljanje umetnih kromosomov dolžine do večih megabaz (Mb). Poleg tega pokazuje Saccharomyces cerevisiae izjemno toleranco glede na dolžino kromosoma, kar daje teoretično osnovo za uporabo kvasov pri gradnji ultra-dolgovatih kromosomov višjih organizmov.

Aplikacije

Yaohai Bio-Pharma v glavnem uporablja dva montažna metoda za sintezo genov: povezovanje z ligazon in povezovanje s DNA polimerazo. Metoda povezovanja z ligazon poveže prekrivajoče in hibridizirajoče 5'-fosfirovane oligonukleotidne fragmente v dvojno navite DNS z uporabo DNA ligazone. Metoda povezovanja s polimerazo uporablja DNA polimerazo za razširjanje prekrivajočih oligonukleotidnih fragmentov skozi hibridizacijo, pridobivanje mešanice različnih dolžin, in končno poenostavljeno oživljanje uspešno sestavljenih celotnih fragmentov z primerniki. Yaohai lahko pomaga strankam izpolniti posebne zahteve pri sintezi genov.

Prav tako aktivno iščemo globalne partnerje, institucije ali posameznike. Ponujamo največje naknadne plačilo v industriji. Če imate katere koli vprašanja, nas prosimo, da nas svobodno kontaktirate: [email protected]