Krožne RNA (circRNA) so razred enoverižne, kovalentno zaprte RNA brez 5' ali 3' koncev. Ta edinstvena lastnost lahko prepreči razgradnjo circRNA z eksonukleazami in opolnomoči circRNA z visoko stabilnostjo in učinkovitostjo prevajanja v primerjavi z linearno mRNA.
circRNA se sintetizira s kroženjem in vitro iz linearnega prekurzorja RNA. Nečistoče, povezane s procesom ali izdelkom, lahko vodijo do prirojenega imunskega odziva, zlasti linearne RNA (prekurzorji RNA, izrezana RNA, izrezani introni). Ključnega pomena je odstraniti nečistoče linearne RNA in pridobiti visoke donose čiste circRNA za in vitro/vivo raziskave in terapevtske aplikacije.
Yaohai Bio-Pharma je vzpostavil nabor tehnologij za sintezo circRNA za zagotavljanje zelo čiste circRNA, ki vključuje zasnovo in optimizacijo zaporedja, in vitro transkripcijo (IVT), cirkularizacijo/ciklizacijo, čistilno preparativno tekočinsko kromatografijo visoke ločljivosti (HPLC) in lipidne nanodelce ( LNP) inkapsulacijo. Vsi izdelki so izdani v skladu s strogimi standardi nadzora kakovosti (QC).
Rezultat
| Izdelek |
Prilagojena zelo čista circRNA |
| Metoda sinteze |
Samospojitev intronov skupine I |
| Vsebnost RNA |
100 µg~10 mg (OD260) |
| dolžina |
50~8,000 nukleotidov |
| Čistost |
A260 / A280 |
| Identifikacija in čistost |
Elektroforeza v agaroznem gelu (AGE), lipidna kromatografija visoke ločljivosti (HPLC) |
| Omilitev |
Voda brez RNaze (tekočina) |
| Dostava |
Ladja s suhim ledom; ali pod temperaturo okolja |
| skladiščenje |
Tekočina, pri -20 °C ali manj; Liofiliziran prašek, pri 4°C |
| uporaba |
Razvoj formulacije LNP, testi na osnovi celic, poskusi na živalih |
Primeri dobre prakse
Razvili smo razširljiv postopek čiščenja, predvsem z uporabo preparativne HPLC, in pripravili circRNA z visoko čistostjo (>95 %).
Slika. Čiščenje in analiza circRNA z visoko čistostjo (98 %)
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
