Profilovanie N-glykánov je nevyhnutné na výrobu biofarmaceutík. Yaohai Bio-Pharma poskytuje službu profilovania N-glykánov pomocou kvapalinovej chromatografie-hmotnostnej spektrometrie (LC-MS) uvoľnených a značených glykánov. Všeobecné kroky na prípravu vzorky N-glykánov zahŕňajú štiepenie glykoproteínu (GP), deglykozyláciu, purifikáciu, značenie/derivatizáciu a extrakciu na pevnej fáze (SPE).
Boli sme zapojení do proteínovej štrukturálnej charakterizácie rôznych veľkých molekúl, vrátane rekombinantných podjednotkových vakcín, nanobodies/VHH/jednodoménové protilátky (sdAbs), fragmenty protilátok, hormóny/peptidy, cytokíny, rastové faktory (GF), enzýmy, kolagény, atď.
Regulačné požiadavky na profilovanie N-glykánov
Podľa smernice ICH Q6B „pre glykoproteíny sa určuje obsah sacharidov (neutrálne cukry, aminocukry a kyseliny sialové). Okrem toho sa v maximálnej možnej miere analyzuje štruktúra sacharidových reťazcov, oligosacharidový vzor (anténny profil) a glykozylačné miesto (miesta) polypeptidového reťazca.
Analytická metóda
| Analýza |
Metódy |
| N-glykánové profilovanie |
Analýza uvoľnených a značených glykánov kvapalinovou chromatografiou a hmotnostnou spektrometriou (LC-MS) |
Postupy
1. Enzymatické uvoľňovanie glykánu pomocou peptidu N-glykozidázy F (PNGáza F)
2. Derivatizácia uvoľnených glykánov 2-aminobenzamidom (2-AB)
3. Čistenie zozbieraných N-glykánov na kolóne TSK Amide - 80, ak sú prítomné veľké množstvá detergentov, neprchavých solí alebo materiálov s voľnými aminoskupinami
4. Značenie fluorescenčným 2-aminobenzamidom (2-AB)
5. LC-MS analýza značených N-glykánov
6. Analýza dát
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
