Disulfidové väzby sa niekedy nazývajú SS väzby alebo disulfidové mostíky. Disulfidové mostíky ovplyvňujú biologickú aktivitu biologických látok, ako sú peptidy, proteíny a protilátky.
Yaohai Bio-Pharma ponúka služby analýzy disulfidových väzieb založené hlavne na kvapalinovej chromatografii a hmotnostnej spektrometrii (LC-MS).
Boli sme zapojení do proteínovej štrukturálnej charakterizácie rôznych veľkých molekúl, vrátane rekombinantných podjednotkových vakcín, nanobodies/VHH/jednodoménové protilátky (sdAbs), fragmenty protilátok, hormóny/peptidy, cytokíny, rastové faktory (GF), enzýmy, kolagény, atď.
Regulačné požiadavky na disulfidové väzby
Existujú rôzne počty a formácie disulfidových mostíkov v rôznych biologických látkach, ktoré by sa mali plne posúdiť počas štúdií charakterizácie proteínov, ak očakávaná primárna sekvencia aminokyselín produktu obsahuje aminokyselinu cysteín. Vyžaduje sa to aj z regulačného dokumentu ICH Topic Q6B.
Analytické metódy
Analýza |
Metódy |
Disulfidové väzby |
Kvapalinová chromatografia-hmotnostná spektrometria (LC-MS) po štiepení |
Pre potrebné údaje úplného hodnotenia disulfidových mostíkov a voľných tiolov vedci z Yaohai Bio-pharma vykonávajú mapovanie peptidov po trávení pomocou špecifickej proteázy. Potom sa pred a po redukcii analyzuje pomocou on-line LC/elektrosprejovej ionizačnej hmotnostnej spektrometrie (ES-MS) a/alebo LC/ES-MS/MS.
Yaohai Bio-pharma môže tiež vykonať Ellmanov test, ktorý je dôležitou súčasťou akéhokoľvek hodnotenia produktu plne obsahujúceho cysteín. V rámci Ellmanovho testu derivatizujeme sulfhydryly pomocou (5,5'-ditio-bis-[2-nitrobenzoovej kyseliny]). Na stanovenie hladín voľných tiolov sa výsledný produkt analyzuje UV spektrofotometriou pri 412 nm.