Deamidácia bočných reťazcov glutamínu a asparagínu je bežnou modifikáciou z hľadiska vplyvu na vlastnosti proteínových biofarmaceutík. V glutamínových zvyškoch môže dôjsť k deamidácii, ale zvyčajne oveľa nižšou rýchlosťou. Rýchlosti deamidácie sú ovplyvnené teplotou, pH, lokálnou proteínovou štruktúrou a priľahlými aminoacylovými zvyškami.
Yaohai BioPharma ponúka službu testovania deamidácie aminokyselín, ktorá vám umožňuje zistiť deamidáciu aminokyselín pomocou kvapalinovej chromatografie-hmotnostnej spektrometrie (LC-MS).
Boli sme zapojení do proteínovej štrukturálnej charakterizácie rôznych veľkých molekúl, vrátane rekombinantných podjednotkových vakcín, nanoprotilátok/VHH/jednodoménových protilátok (sdAbs), fragmentov protilátok, hormónov/peptidov, cytokínov, rastových faktorov (CF), enzýmov, kolagénov, atď.
Regulačné požiadavky na deamidáciu aminokyselín
Podľa smerníc ICH Q6B možno dezaminované formy detegovať a charakterizovať chromatografickými, elektroforetickými a/alebo inými relevantnými analytickými metódami.
Analytické metódy
| Analýza |
Metódy |
| Deamidácia |
Kvapalinová chromatografia-hmotnostná spektrometria (LC-MS) |
Postupy
napr. deamidácia asparágovej kyseliny
1. Enzymatické trávenie
2. LC-MS za podmienok vysokoúčinnej kvapalinovej chromatografie (HPLC).
3. Analýza dát
K deamidácii asparagínu dochádza prostredníctvom sukcínimidového medziproduktu (Suc), ktorý je náchylný na racemizáciu a hydrolýzu, čím sa získajú štyri izoméry Asp, vrátane L-Asp, L-IsoAsp, D-Asp a D-IsoAsp.
Teoreticky by deamidácia Gln mohla generovať štyri zodpovedajúce izoméry Glu prostredníctvom procesu podobného deamidácii Asn.
Hmotnostná spektrometria s vysokým rozlíšením ľahko identifikuje 1-Da hmotnostný rozdiel medzi peptidmi obsahujúcimi Asn/Gln a ich zodpovedajúcimi dezaminovanými náprotivkami Asp/Glu.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
