Profiling N-glykanov je nevyhnutný pre výrobu biolfarmaceutík. Yaohai Bio-Pharma ponúka služby profilingu N-glykanov pomocou kapalnej chromatografie - masspektrometrie (LC-MS) uvoľnených a označených glykanov. Všeobecné kroky na prípravu vzoriek N-glykanov zahŕňajú hydrolýzu glykoproteínov (GP), odstránenie cukorov, čistenie, označovanie/deriváciu a extrakciu na pevnej fáze (SPE).
Boli sme zapojení do charakterizácie štruktúry proteínov rôznych veľkých molekúl, vrátane rekombinantných podjednotkových vakcín, nanotěles/VHHs/jednodoménových antitela (sdAbs), fragmentov antitela, hormónov/peptidov, cytokínov, rastových faktorov (GF), enzymov, kolagénov atď.
Regulačné požiadavky pre profiling N-glykanov
Podľa smernice ICH Q6B, „pre glykoproteiny sa určí sacharidový obsah (neutrálny cukry, aminocukry a sialové kyseliny). navyše sa analyzujú štruktúry sacharidových reťazcov, oligosacharidový vzor (anténny profil) a miesto glykosylácie polypeptidového reťazca v rozsahu, ak je to možné.
Analytická metóda
| Analýza |
Metódy |
| Profiling N-glykanov |
Analýza LC-MS uvoľnených a označených glykanov |
Procedúry
1. Enzymatické uvoľnenie glykanov peptidovou N-glycosidázou F (PNGase F)
2. Derivácia uvoľnených glykanov 2-aminobenzamidom (2-AB)
3. Očistenie uvoľnených N-glykanov na slpci TSK Amide - 80, ak sú prítomné veľké množstvá detergентov, nevôdneľivých solí alebo látek s voľnými aminovými skupinami
4. Označovanie fluoresecntným 2-aminobenzamidom (2-AB)
5. Analýza LC-MS označených N-glykanov
6. Analýza dát
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
