Význam vývoja procesu dolnej cesty (DSP)
Celá fermentačná tekutina obsahuje cieľový bílkovinu alebo plazmid, ako aj produktovo a procesovo súvisiace nečistoty, napr. agregáty, mikrobiálne bunecné substráty, Host Cell Proteins (HCP), Host Cell DNA (HCD), endotoxiny a antibiotiká.
Preto je klúčové navrhnúť efektívny DSP, čistiaci proces, ktorý odstráni určité nečistoty a vyprodukuje veľmi čistú a vysokou kvalitu lekárskych látky. navyše optimalizácia čistiacich procesov môže pomôcť zvýšiť návratnosť produkcie, znížiť náklady a vylepšiť škálovateľnosť a reprodukovateľnosť procesu.
Kľúčové slová: vývoj procesu, optimalizácia, validácia, proces čistenia, chromatografia, odstránenie nečistôt, odstránenie HCP, eliminácia HCD, odstránenie endotoxínov, denatúraca białka a refoldovanie, sestavenie VLP, konjugácia
Aplikácia: biopharmaceutický priemysel, ľudská medicína, veterinárna medicína, vakcíny, rekombinantné veľké molekulové biologicumy, rekombinantné biologicumy, biologické reagenty
Riešenia DSP spoločnosti Yaohai Bio-Pharma
Máme rozsiahle skúsenosti s izoláciou cieľových białok alebo plazmidov z komplexných matic prostredníctvom vývoja a optimalizácie procesu čistenia na dolnej strane. Existujú rôzne typy jednotiek operácií vhodných pre čistenie biologic, vrátane centrifugácie, filtračii, homogenizácie, alkaline lyzy, ultrafiltračii, precipitácie, denatúracie białok a refoldovania, chromatografie atď.
Naše dostupné služby v oblasti vývoja čistenia zahŕňajú:
- Vývoj celého procesu čistenia od sbierky bunkov alebo supernatanu po konečnú aktívnu látku.
- Optimalizácia procesu čistenia na základe produktovo a procesovo spojených nečistôt pre zvýšenie kvality a bezpečnosti produktu, napr. HCP, HCD, endotoxín.
- Definícia a optimalizácia kľúčových parametrov v jednom alebo viacerých jednotkových operáciách, vrátane lišenia buniek, tangenciálneho toku filtračného, testovania rezín, chromatografie, denatúracie białka a jeho refaldovania atď.
- Optimalizácia procesu v súvislosti s kvalitou, výnosom, obnovením, nákladmi a škálovanosťou.
- Validácia procesu ďalšieho čistenia.
- Hodnotenie rozsahu parametrov na základe rizík a Návrh experimentov (DoE) v modelovaní procesu.
Podrobnosti služby
Štandardizované platformy na čistenie białok alebo plazmidov sú založené na viacerých hrubých krokoch čistenia a menej ako 4 krokoch chromatografie, vrátane zachytávacieho, medzikrokového čistenia a dokončovacieho.
| Podrobnosti služby |
Jednotkové operácie |
Parametre |
| Hrubé čistenie |
Centrifugácia |
Otáčky za minútu, Čas |
| Homogenizácia vysokým tlacom |
Celkový pevný obsah, Tlak, Cykly |
| Spojité alkalické lyzovanie |
Pomer znovu zvážených buniek ku lyzátovému riešiteľu, Čas lyzovania |
| Tangenciálny tokovýfiltrovanie |
Materiál membrány a veľkosť porov, Rýchlosť krmenia Transmembránny tlak (TMP), Pomer objemu filtrátu ku ploche membrány |
| Odpadávanie |
Typ a koncentrácia odpadávača, Prídavok, pH, Teplota, Čas |
| Denatúracia a refoldovanie |
Solubilizácia proteínov inkluzybných telies |
Koncentrácia denatúrantu (napr. Urea, Guanidín HCl, Silný ionický detergент), Detergenty (napr. Sodná dodecylsulfát, SDS), Redukčné agenty (napr. Dithiothreitol, DTT), Chelátové agenty (Ethylenediaminetetraacetonová kyselina, EDTA), Teplota, Čas |
| Refalding bílkovín |
Metódy refaldingu (roz watering, dialýza alebo SEC refalting), Koncentrácie bílkovín, Väzivá, pH, Teplota, Čas, Oxidujúce a redukčné agenty (napr. Glutathion, GSH / Oxydovaný glutathion, GSSH, DTT / GSSH, Cysteína / Cystín), Malé molekulové aditívy (L-arginína, Urea, Guanidín / HCl, a detergent) |
| Zachytenie, Počiatočné čistenie a Doprava |
AC (Afinítne chromatografie) |
Niekoľko druhov chromatografického rezinového/stĺpca (napr., AC, IEX, HIC, SEC, RPC, MMC), Dĺžka a priemer stĺpca, Sústava väziva, Objem vstrelky, Sústava mobilnej fázy (adsorpčná a desorpčná), pH, Rýchlosť prieteču, Podmienky väzenia, mytí a eluácie. |
| IEX (Anionová alebo Kationová chromatografia) |
| HIC (Hydrofobická interakčná chromatografia) |
| Odsoľovanie a/alebo kromatografia vylučovania podľa veľkosti (SEC) |
| RPC (Reverzne fázová kromatografia) |
| MMC, Miešaná režimová kromatografia |
Prípadová štúdia<br>
PRIPOD 1
Boli sme mandátovaní na vyvinutie a optimalizáciu procesu čistenia downstream s cieľom zvýšiť čistotu bílkoviny z 85% na 90%, pričom sa zníži počet krokov kromatografie.
Yaohai predložil robustný a škálovateľný čistiaci proces s tromi krokmi kromatografie pre cieľové bílkovinu, bakteriálnu alergiu. A koncová čistota dosiahla 95%.
PRIPOD 2
Yaohai bol pridelený naším klientom na optimalizáciu procesu odstránenia endotoxínov z vírusovopodobných častíc (VLP) vakcín.
Náš tím provedol optimalizáciu parametrov kromatografie a pripravil látku lieku s čistotou 98% a zvyškom endotoxínov 12,8EU/mg.
Naše skúsenosti
- Boli sme zapojení do vývoja a výroby rôznych veľkých molekúl, vrátane rekombinantných subunitných vakcín, VLPs, hormónov (inšulín, GLP-1, rastový hormón), cytokínov (Interleukin-2/IL-2, IL-15, IL-21), rastových faktorov (EGF, FGF, NGF), nanotela/singlovodomerných antibodií (sdAbs), enzymov atď.
Zariadenie
Používame priemyselné vedúce systémy AKTA Pure, AKTA Avant a Prípravné HPLC pre vykonávanie rôznych chromatografických metód, vrátane afinnej, ionovej výmeny, hydrofobnej interakcie, reverznej fázy a chromatografie podľa veľkosti.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
