O perfil de N-glicanos é essencial para a produção de produtos biofarmacêuticos. A Yaohai Bio-Pharma fornece serviço de perfil de N-glicano usando cromatografia líquida-espectrometria de massa (LC-MS) de glicanos liberados e marcados. As etapas gerais para a preparação da amostra de N-glicanos incluem digestão da glicoproteína (GP), desglicosilação, purificação, marcação/derivatização e extração em fase sólida (SPE).
Estamos envolvidos na caracterização estrutural de proteínas de várias moléculas grandes, incluindo vacinas de subunidades recombinantes, nanocorpos/VHHs/anticorpos de domínio único (sdAbs), fragmentos de anticorpos, hormônios/peptídeos, citocinas, fatores de crescimento (GF), enzimas, colágenos, etc.
Requisitos regulamentares para perfil de N-glicano
De acordo com a diretriz ICH Q6B, “para glicoproteínas, o conteúdo de carboidratos (açúcares neutros, aminoácidos e ácidos siálicos) é determinado. Além disso, a estrutura das cadeias de carboidratos, o padrão de oligossacarídeo (perfil antenal) e o(s) local(is) de glicosilação da cadeia polipeptídica são analisados na medida do possível.
Método Analítico
| Análise |
De Depósito |
| Perfil de N-glicano |
Análise por Cromatografia Líquida-Espectrometria de Massa (LC-MS) de glicanos liberados e marcados |
Procedimentos
1. Liberação enzimática de glicano com Peptídeo N-Glicosidase F (PNGase F)
2. Derivatização de glicanos liberados por 2-aminobenzamida (2-AB)
3. Purificação dos N-glicanos colhidos em uma coluna TSK Amida - 80 se grandes quantidades de detergentes, sais não voláteis ou materiais com grupos amino livres estiverem presentes
4. Rotulagem por 2-aminobenzamida fluorescente (2-AB)
5. Análise LC-MS de N-glicanos marcados
6. Análise de dados
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