As proteínas recombinantes frequentemente apresentam oxidação de cadeias laterais de aminoácidos expostas, como triptofano (Trp) e metionina (Met), alterando as propriedades físico-químicas das proteínas. Estas alterações podem, por sua vez, contribuir para alterar as funções biológicas das proteínas afectadas, tais como perda de ligação, redução da actividade enzimática, depuração inesperadamente rápida. As proteínas são alvos importantes para reações oxidativas porque reagem rapidamente com oxidantes e são abundantes nas células, tecidos extracelulares e fluidos corporais.
Portanto, monitorar a oxidação de proteínas é fundamental para o sucesso do desenvolvimento biofarmacêutico.
A Yaohai Bio-Pharma oferece serviço de análise de oxidação de aminoácidos, que permite determinar a oxidação de aminoácidos por Cromatografia Líquida-Espectrometria de Massa (LC-MS).
Estamos envolvidos na caracterização estrutural de proteínas de várias moléculas grandes, incluindo vacinas de subunidades recombinantes, nanocorpos/VHHs/anticorpos de domínio único (sdAbs), fragmentos de anticorpos, hormônios/peptídeos, citocinas, fatores de crescimento (GF), enzimas, colágenos, etc.
Requisitos Regulatórios para Oxidação de Aminoácidos
De acordo com as diretrizes Q6B do ICH, as formas oxidadas podem ser detectadas e caracterizadas por métodos cromatográficos, eletroforéticos e/ou outros métodos analíticos relevantes (por exemplo, cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC), eletroforese capilar, espectroscopia de massa, dicroísmo circular).
Métodos analíticos
| Análise |
De Depósito |
| Oxidação de aminoácidos |
LC-MS, cromatografia líquida de alta eficiência de fase reversa (RP-HPLC) ou cromatografia de interação hidrofóbica Cromatografia líquida de alta eficiência (HIC-HPLC) e espectrometria de massa |
Procedimentos analíticos
1. Preparação da amostra
2. LC-MS
3. Análise de dados
Os resíduos de triptofano (Trp) são especialmente propensos à oxidação devido à alta reatividade do indol aromático com espécies reativas de oxigênio. A oxidação do Trp requer alguma exposição de resíduos de Trp que normalmente estão enterrados na estrutura tridimensional da proteína.
Porém, quando os resíduos de Trp são oxidados, eles podem se transformar em uma variedade de produtos com propriedades muito diferentes do Trp original. A via mais comum para a oxidação do Trp inclui a formação de N-formilquinurenina (diferença de massa: +32).
Outro aminoácido comumente oxidado é a metionina. O átomo de enxofre no resíduo Met pode aceitar um ou dois átomos de oxigênio levando à formação de sulfóxido (diferença de massa: +16) ou sulfona (diferença de massa: +32), correspondentemente. Esta modificação é relativamente comum devido à exposição superficial tipicamente alta do Met.
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