A Importância da Triagem de Linhagens
A triagem de hospedeiros adequados é necessária para o desenvolvimento CMC de biológicos, determinando a qualidade e consistência do produto e do processo de fabricação. O objetivo direto da triagem de hospedeiros é fornecer um banco primário de células (PCB) candidato, com altos níveis de expressão e alta estabilidade tanto em termos de estabilidade por passagem quanto de estabilidade em armazenamento. A triagem de hospedeiros adequados é necessária por duas razões principais:
- Primeiro, selecionar o hospedeiro microbiano com alto nível de expressão. Existem várias linhagens comerciais disponíveis, que são usadas para expressar diferentes tipos de proteínas, como proteínas tóxicas, proteínas solúveis ou proteínas eucarióticas.
- Em segundo lugar, para screening do hospedeiro com estabilidade genética. O teste de estabilidade genética é um ponto-chave durante todo o ciclo de vida da produção. Sugere-se que uma alta estabilidade genética seja reconhecida como outra característica chave para uma cepa adequada.
Palavras-chave: seleção de cepas microbianas, screening de cepas microbianas, screening de alta throughput de bactérias ou leveduras, screening de cepas produtivas, screening de cepas altamente estáveis, screening de cepas geneticamente estáveis Aplicação: medicina humana, medicina veterinária, vacinas, biologia sintética, biológicos de moléculas grandes recombinantes, reagentes biológicos
Serviços de Screening de Cepas da Yaohai Bio-Pharma
Beneficiando de mais de 10 anos de experiência em CDMO em biológicos microbianos, apoiamos o desenvolvimento e fabricação de várias moléculas grandes, incluindo vacinas recombinantes de subunidades, partículas semelhantes a vírus (VLP), hormônios (insulina, GLP-1, hormônio do crescimento), citocinas (Interleucina-2/IL-2, IL-15, IL-21), fatores de crescimento (EGF, FGF, NGF), nanocorpos/anticorpos de domínio único (sdAbs), enzimas, etc.
Acumulamos experiências ricas na seleção de vários tipos de vetores plasmídicos e hospedeiros microbianos, incluindo Bactérias Escherichia coli (E. coli), e levedura Pichia pastoris (P. pastoris), Saccharomyces cerevisiae (S. cerevisiae), Hansenula polymorpha (H. polymorpha). Podemos encontrar o melhor sistema de expressão para seus biológicos únicos.
Coletamos vários hospedeiros microbianos com fontes claras e CoA padrão, incluindo E.Coli expressão bacteriana e expressão em leveduras.
Detalhes do Serviço
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Serviços
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Detalhes do Serviço
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Prazo mínimo/dia
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Entregáveis
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Construção de cepa (E. coli)
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Transformação de plasmídeo (multi-hospedeiros)
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5
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COA de hospedeiros comerciais Relatório de construção de cepa
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Verificação por PCR
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Purificação da cepa
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Preservação da cepa
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Construção de Cepa (Levedura)
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Preparação de células de levedura competentes
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10
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Linearização de plasmídeo
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Transformação eletroquímica
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Triagem de resistência\/deficiência nutricional
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Purificação da cepa
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Preservação da cepa
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Triagem de hospedeiro adequado
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Extração de DNA plasmídico ou genômico
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15-20
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Processo de triagem do hospedeiro COA de cepas engenhadas
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Verificação por PCR, digestão com enzima de restrição
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Sequenciamento de Gene Alvo
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Triagem de hospedeiros de alta expressão
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Triagem de hospedeiros com estabilidade genética
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Preservação da cepa
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Estudo de Caso
Um hospedeiro adequado melhora o nível de expressão de proteínas em 2,5 vezes.
Somos contratados para desenvolver cepas de alta produção E. coli e tentamos três tipos de hospedeiros comerciais E. coli com base nas características da proteína alvo. Foi mostrado que as cepas S1-1 e S1-2 (Fig A: Faixa 1,2) aumentaram o nível de proteína em 3,5 vezes em relação à cepa inicial do cliente (Fig A: Faixa 3).
Além disso, a cepa S1-1 apresentou alta estabilidade genética (Fig B), e foi reconhecida como cepa candidata para o banco primário de células (PCB).
Características dos Nossos Serviços
Comprovada expertise com diversos hospedeiros microbianos, por exemplo, E. coli DH5α, TOP10, Trans10, BL21; P. pastoris SMD1168H, X-33, GS115, PichiaPink strain1/2/3/4; S. cerevisiae e H. polymorpha .
Temos experiência com E. coli secreção periplasmática, expressão solúvel e de corpos de inclusão, bem como expressão intracelular ou secreta em leveduras. Não adicionamos antibióticos ou os adicionamos sob orientação regulatória.
Estabelecemos uma plataforma de triagem de alta throughput para identificar cepas de alta produção e estáveis entre mais de cem cepas candidatas.
Garantimos que o processo de engenharia genética e triagem de cepas seja rastreável, de acordo com as Boas Práticas de Gestão de Dados e Registros.
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