Determinação do Peso Molecular por LC-MS
O peso molecular intacto sempre foi reconhecido como uma característica importante dos biológicos. A análise do peso molecular intacto é usada para demonstrar os produtos de proteínas/peptídeos e verificar os biológicos. Medir o peso da molécula é uma exigência das diretrizes regulatórias.
A Yaohai Bio-Pharma oferece análise de peso molecular intacto em condições nativas, reduzidas e N-desglicosiladas. Utilizamos Cromatografia Líquida-Espectrometria de Massa (LC-MS) para determinar o peso molecular intacto.
Requisitos Regulatórios para o Peso Molecular
É recomendado no ICH Q6 que “peso molecular (ou tamanho) seja determinado usando cromatografia de exclusão por tamanho, eletroforese em gel de poliacrilamida com SDS (sob condições redutoras e não redutoras), espectrometria de massa (MS) e outras técnicas apropriadas”.
Métodos Analíticos
| Análise |
Métodos |
| Peso molecular |
LC-MS / Cromatografia Líquida/Eletrospray de Espectrometria de Massa (LC/ES-MS) de proteínas nativas, reduzidas, N-deglicosiladas ou subunidades |
Procedimentos Analíticos
Peso Molecular Inteiro:
- Realizando LC-MS no amostra nativa conforme recebida.
- Análise de dados de LC-MS.
Peso Molecular Reduzido:
- Tratando a amostra de proteína com um agente redutor adequado;
- Realizando LC-MS na proteína reduzida;
- Análise de dados de LC-MS.
Peso Molecular N-deglicosilado:
- Removendo os N-glicanos com uma enzima adequada;
- Realizando LC-MS no proteína N-desglicosilada;
- Análise de dados de LC-MS.
Peso Molecular Reduzido e N-desglicosilado:
- Tratando a amostra de proteína com um agente redutor adequado;
- Removendo os N-glicanos com uma enzima adequada;
- Realizando LC-MS em proteína Reduzida e N-desglicosilada;
- Análise de dados de LC-MS.
Peso Molecular da Subunidade de Proteína:
- Cisão da Subunidade
- Realizando LC-MS na Subunidade de Proteína
- Análise de Dados de LC-MS
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