O perfil de N-glicanas é essencial para a produção de biofármacos. A Yaohai Bio-Pharma oferece o serviço de perfil de N-glicanas utilizando Cromatografia Líquida-Espectrometria de Massa (LC-MS) de glicanas liberadas e rotuladas. As etapas gerais para preparar amostras de N-glicanas incluem digestão da glicoproteína (GP), deglicosilação, purificação, rotulação/derivatização e Extração em Fase Sólida (SPE).
Estivemos envolvidos na Caracterização Estrutural de Proteínas de várias grandes moléculas, incluindo Vacinas Recombinantes de Subunidades, Nanocorpos/VHHs/ Anticorpos de Domínio Único (sdAbs), Fragmentos de Anticorpos, Hormônios/Peptídeos, Citocinas, Fatores de Crescimento (GF), Enzimas, Colágenos, etc.
Requisitos Regulatórios para Perfil de N-Glicanas
De acordo com a diretriz ICH Q6B, “para glicoproteínas, o teor de carboidratos (açúcares neutros, amino açúcares e ácidos siálicos) é determinado. Além disso, a estrutura das cadeias de carboidratos, o padrão de oligossacarídeos (perfil antenário) e os sítios de glicosilação da cadeia polipeptídica são analisados na medida do possível.
Método Analítico
| Análise |
Métodos |
| Perfis de N-glicanas |
Análise por Cromatografia Líquida-Espectrometria de Massa (LC-MS) de glicanos liberados e rotulados |
Procedimentos
1. Liberação enzimática de glicanos com Peptídeo N-Glicosidase F (PNGase F)
2. Derivatização dos glicanos liberados por 2-aminobenzamida (2-AB)
3. Purificação dos N-glicanos colhidos em uma coluna TSK Amide - 80 se grandes quantidades de detergentes, sais não voláteis ou materiais com grupos aminados livres estiverem presentes
4. Rotulação por fluorescência com 2-aminobenzamida (2-AB)
5. Análise LC-MS de N-glicanos rotulados
6. O que é? Análise de dados
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