A Significância do Desenvolvimento do Processo Downstream (DSP)
O caldo fermentado total contém proteína ou plasmídeo de interesse, além de impurezas relacionadas ao produto e ao processo, por exemplo, agregados, substratos celulares microbianos, Proteínas de Células Hospedeiras (HCP), DNA de Células Hospedeiras (HCD), endotoxina e antibióticos.
Portanto, é essencial projetar um DSP eficiente, processo de purificação, para remover certas impurezas e produzir uma substância medicamentosa altamente purificada e de alta qualidade. Além disso, a otimização do processo de purificação pode ajudar a aumentar a recuperação do produto, reduzir custos e melhorar a escalabilidade e reprodutibilidade do processo.
Palavras-chave: desenvolvimento de processo, otimização e validação, processo de purificação, cromatografia, eliminação de impurezas, remoção de HCP, eliminação de HCD, remoção de endotoxinas, desnaturação e refoldamento de proteínas, montagem de VLP, conjugação
Aplicação: indústria biofarmacêutica, medicina humana, medicina veterinária, vacina, biológicos de grande molécula recombinante, biológicos recombinantes, reagente biológico
Soluções DSP da Yaohai Bio-Pharma
Temos ampla experiência na isolamento de proteínas-alvo ou plasmídeos de matrizes complexas por meio do desenvolvimento e otimização do processo de purificação downstream. Existem diferentes tipos de operações unitárias adequadas para a purificação de biológicos, incluindo centrifugação, filtração, homogeneização, lise alcalina, ultrafiltração, precipitação, desnaturação e refoldamento de proteínas, cromatografia, etc.
Nossos serviços disponíveis de desenvolvimento de purificação incluem:
- Desenvolvimento do processo completo de purificação, desde a coleta de células ou sobrenadante até o ingrediente ativo final.
- Otimização do processo de purificação com base em impurezas relacionadas ao produto e ao processo para aumentar a qualidade e segurança do produto, por exemplo, HCP, HCD, endotoxina.
- Definição e otimização de parâmetros-chave em uma ou mais operações unitárias, incluindo lise celular, filtração por fluxo tangencial, triagem de resina, cromatografia, desnaturação e refoldamento de proteínas, etc.
- Otimização do processo em termos de qualidade, rendimento, recuperação, custo e escalabilidade.
- Validação do processo de purificação downstream.
- Avaliação baseada em risco do intervalo de parâmetros e Design of Experiments (DoE) no modelamento de processos.
Detalhes do Serviço
Plataformas padronizadas de purificação de proteínas ou plasmídeos são baseadas em múltiplas etapas de purificação bruta e menos de 4 etapas de cromatografia, incluindo captura, purificação intermediária e polimento.
| Detalhes do Serviço |
Operações Unitárias |
Parâmetros |
| Purificação Bruta |
Centrifugação |
Velocidade Rotacional, Tempo |
| Homogeneização de alta pressão |
Teor Total de Sólidos, Pressão, Ciclos |
| Lise Alcalina Contínua |
A razão de Células Re suspensas para Solução de Lise, Tempo de Lise |
| Filtragem por Fluxo Tangencial |
Material da Membrana e Tamanho de Poros, Taxa de Fluxo do Alimento Pressão Transmembrana (TMP), Volume de Filtrado em Relação à Área da Membrana |
| Precipitação |
Tipo e Concentração de Precipitante, Aditivo, pH, Temperatura, Tempo |
| Desnaturação e Replegamento |
Solubilização de proteína de corpo inclusivo |
Concentração de Denaturante (por exemplo, Ureia, Guanidina HCl, Detergente Iônico Forte), Detergentes (por exemplo, Sódio laurilsulfato, SDS), Agentes Redutores (por exemplo, Ditiotreitol, DTT), Agentes quelantes (Ácido etilenodiaminotetraacético, EDTA), Temperatura, Tempo |
| Reconformação de proteínas |
Métodos de Reconformação (diluição, dialise ou reconformação por SEC), Concentrações de Proteínas, Buffer, pH, Temperatura, Tempo, Agentes Oxidantes e Redutores (por exemplo, Glutationa, GSH/Oxidada Glutationa, GSSH, DTT/GSSH, Cisteína/Cistina), Aditivos de Pequenas Moléculas (L-arginina, Ureia, Guanidina/HCl, e Detergente) |
| Captura, Purificação Intermediária e Polimento |
CC (Cromatografia por Afinitade) |
Vários tipos de resina/coluna de cromatografia (por exemplo, CC, IEC, HIC, SEC, RPC, MMC), Comprimento e Diâmetro da Coluna, Composição do Buffer, Volume de Injeção, Composição da Fase Móvel (Adsorção e Dessorção), pH, Taxa de Fluxo, Condições de Ligação, Lavagem e Eluição. |
| IEC (Cromatografia de Troca Iônica Aniônica ou Catiônica) |
| HIC (Cromatografia de Interação Hidrofóbica) |
| Desalificação e/ou cromatografia de exclusão de tamanho (SEC) |
| RPC (Cromatografia de Fase Reversa) |
| MMC, Cromatografia de Modo Misto |
Estudo de Caso
Caso 1
Fomos contratados para desenvolver e otimizar o processo de purificação downstream para aumentar a pureza da proteína de 85% para 90% enquanto reduzimos os passos de cromatografia.
Yaohai entregou um processo de purificação robusto e escalável com 3 etapas de cromatografia para a proteína alvo, uma alergia bacteriana. E a pureza final atingiu 95%.
Caso 2
Yaohai foi designado pelo nosso cliente para otimizar o processo de remoção de endotoxinas da vacina de partículas semelhantes a vírus (VLP).
Nossa equipe realizou a otimização dos parâmetros de cromatografia e preparou uma substância medicinal com pureza de 98% e resíduo de endotoxina de 12,8EU/mg.
Nossa Experiência
- Estivemos envolvidos no desenvolvimento e fabricação de várias moléculas grandes, incluindo vacinas de subunidade recombinante, VLPs, hormônios (insulina, GLP-1, hormônio do crescimento), citocinas (Interleucina-2/IL-2, IL-15, IL-21), fatores de crescimento (EGF, FGF, NGF), nanocorpos/anticorpos de domínio único (sdAbs), enzimas, etc.
Equipamento
Utilizamos os sistemas de ponta da indústria AKTA Pure, AKTA Avant e HPLC Preparativo para a execução de vários métodos de cromatografia, incluindo afinidade, troca iônica, interação hidrofóbica, fase reversa e cromatografia de exclusão por tamanho.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
