Proteínas recombinantes frequentemente sofrem a oxidação de cadeias laterais de aminoácidos expostos, como triptofano (Trp) e metionina (Met), alterando as propriedades físico-químicas das proteínas. Essas mudanças podem, por sua vez, contribuir para alterar as funções biológicas das proteínas afetadas, como perda de ligação, redução da atividade enzimática, eliminação inesperadamente rápida. As proteínas são alvos importantes para reações oxidativas porque reagem rapidamente com oxidantes e são abundantes em células, tecidos extracelulares e fluidos corporais.
Portanto, monitorar a oxidação de proteínas é crucial para o desenvolvimento bem-sucedido de biotecnológicos.
A Yaohai Bio-Pharma oferece serviços de análise de oxidação de aminoácidos, que permitem determinar a oxidação de aminoácidos por Cromatografia Líquida-Capotagem de Massa (LC-MS).
Estivemos envolvidos na Caracterização Estrutural de Proteínas de várias moléculas grandes, incluindo Vacinas de Subunidade Recombinante, Nanocorpos/VHHs/anticorpos de domínio único (sdAbs), Fragmentos de Anticorpos, Hormônios/Peptídeos, Citocinas, Fatores de Crescimento (GF), Enzimas, Colágenos, etc.
Requisitos Regulatórios para Oxidação de Aminoácidos
De acordo com as diretrizes ICH Q6B, formas oxidadas podem ser detectadas e caracterizadas por métodos cromatográficos, eletroforéticos e/ou outros métodos analíticos relevantes (por exemplo, Cromatografia Líquida de Alto Desempenho (HPLC), eletroforese capilar, espectrometria de massa, dicroidismo circular).
Métodos Analíticos
| Análise |
Métodos |
| Oxidação de Aminoácidos |
LC-MS, Cromatografia Líquida de Alto Desempenho em Fase Reversa (RP-HPLC) ou Cromatografia Líquida de Alto Desempenho de Interação Hidrofóbica (HIC-HPLC) e espectrometria de massa |
Procedimentos Analíticos
1. Preparação da Amostra
2. LC-MS
3. Análise de dados
Os resíduos de triptofano (Trp) são especialmente propensos à oxidação devido à alta reatividade do indol aromático com espécies reativas de oxigênio. A oxidação de Trp requer alguma exposição dos resíduos de Trp que normalmente estão enterrados na estrutura tridimensional da proteína.
No entanto, quando os resíduos de Trp são oxidados, eles podem se transformar em uma variedade de produtos com propriedades muito diferentes do Trp original. O caminho mais comum para a oxidação de Trp inclui a formação de N-formilquinurenina (Diferença de massa: +32).
Outro aminoácido comumente oxidado é a metionina. O átomo de enxofre no resíduo de Met pode aceitar um ou dois átomos de oxigênio, levando à formação de sulfoxido (Diferença de massa: +16) ou sulfona (Diferença de massa: +32), respectivamente. Esta modificação é relativamente comum devido à alta exposição superficial típica de Met.
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