A desamidação das cadeias laterais de glutamina e asparagina é uma modificação comum em termos de impacto nas propriedades dos biofármacos proteicos. A desamidação pode ocorrer em resíduos de glutamina, mas geralmente a uma taxa muito menor. As taxas de desamidação são influenciadas pela temperatura, pH, estrutura local da proteína e resíduos aminoacil flanqueantes.
A Yaohai BioPharma oferece o serviço de teste de desamidação de aminoácidos, que permite detectar a desamidação de aminoácidos por Cromatografia Líquida-Espectrometria de Massa (LC-MS).
Estivemos envolvidos na Caracterização Estrutural de Proteínas de várias grandes moléculas, incluindo Vacinas Recombinantes de Subunidades, Nanocorpos/VHHs/Anticorpos de Domínio Único (sdAbs), Fragmentos de Anticorpos, Hormônios/Peptídeos, Citocinas, Fatores de Crescimento (CF), Enzimas, Colágenos, etc.
Requisitos Regulatórios para Desamidação de Aminoácidos
De acordo com as diretrizes ICH Q6B, formas deamidadas podem ser detectadas e caracterizadas por métodos analíticos cromatográficos, eletroforéticos e/ou outros métodos analíticos relevantes.
Métodos Analíticos
| Análise |
Métodos |
| Deamidação |
Cromatografia Líquida a Alta Pressão-Espectrometria de Massa (LC-MS) |
Procedimentos
por exemplo, deamidação de aspártico
1. Digestão enzimática
2. LC-MS sob a condição de Cromatografia Líquida de Alto Desempenho (HPLC)
3. Análise de dados
A deamidação de asparagina ocorre por meio de um intermediário succinimida (Suc), que é suscetível à racemização e hidrólise, produzindo quatro isômeros de Asp, incluindo L-Asp, L-IsoAsp, D-Asp e D-IsoAsp.
Teoricamente, a deamidação de Gln poderia gerar quatro isômeros correspondentes de Glu por meio de um processo semelhante à deamidação de Asn.
A espectrometria de massa de alta resolução identifica facilmente a diferença de massa de 1 Da entre peptídeos contendo Asn/Gln e seus correspondentes contrapartes desamidados Asp/Glu.
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