Niestandardowa synteza saRNA
Samoodpowiadające się RNA (saRNA), znane również jako RNA replikonowe, kodują sekwencje mRNA transkrypcji in vitro (IVT) oraz geny wirusowego replicasu pochodzące od alfavirusów lub flaviwirusów. Geny wirusowego replicasu pozwalają na samoodpowiadanie się RNA, co prowadzi do zwiększonego wyrażania białek i minimalnej wymaganej dawki RNA w porównaniu do nieodpowiadających się RNA. Kolejnym aspektem jest to, że saRNA jest względnie dużą cząsteczką (więcej niż 14 kb).
Yaohai Bio-Pharma opracowało zestaw technologii syntezy mRNA, aby dostarczać mRNA bez wzmacniania oraz samowzmacniający się mRNA (1000 nt~14000 nt), takie jak projektowanie i optymalizacja sekwencji, IVT, czyszczenie, liofilizacja i otaczanie lipidowymi nanopartkami (LNP). Wszystkie produkty są wydawane zgodnie ze ścisłymi standardami kontroli jakości.
Rys.1 Strukturalne cechy IVT mRNA: konwencjonalne, cykliczne i samowzmacniające się mRNA.
Cechy sekwencyjne samowzmacniającego się mRNA
RNA samowzmocniające się składa się z czterech białek niestrukturalnych (oznaczonych jako nsP1, nsP2, nsP3 i nsP4), które pochodzą z alfa-wirusów, konkretnie z wirusa wenezuelskiego zapalenia mózgu u koni (VEEV). Spośród nich, nsP1 wykazuje dwie działania enzymatyczne, mianowicie GTaza i N7MTaza, podczas gdy nsP2 posiada działalność RTPazy, która jest kluczowa dla tworzenia struktury Cap 0 na mRNA uzyskanego przez in vitro transkrypcję. Ponadto, nsP2 działa jako proteaza i helikaza, wspomagając skomplikowaną przetwarzanie całego kompleksu nsP. Dokładna funkcja nsP3 pozostaje niejasna, ale białko to oddziałuje z różnorodnymi białkami komórkowymi gospodarza, co przyczynia się do osłabienia odpowiedzi przeciwwirusowej uruchamianej przez organizm gospodarza.
Region promotorowy subgenomiczny (SGP) alfa-wirusów znajduje się przed genem interesującego produktu (GOI). Element SGP umożliwia rozpoczęcie transkrypcji GOI, pomijając odczyt sekwencji kodujących białka niestrukturalne wirusa.
Rys. 2 Synteza i badania komórkowe saRNA eGFP platformy Yaohai Bio-Pharma RNASci.
Dostosowane rozwiązania saRNA
Protokół syntetyczny saRNA jest podobny do mRNA: Własna synteza mRNA
- Projekt sekwencji
- Przygotowanie szablonu plazmidowego
- transkrypcja in vitro (IVT)
- enzymatyczne zakonczenie mRNA
- zakonczenie mRNA podczas transkrypcji
- czyszczenie mRNA
- liofilizacja mRNA
- Encapsulacja LNP
- Analiza i Testy
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
