il mRNA è stato ampiamente utilizzato nello studio delle funzioni di geni o proteine. Nello stesso tempo, è comune nello sviluppo di biologici profilattici e terapeutici. Come strategia comune di sintesi di molecole di RNA, la trascrizione in vitro (IVT) ci consente di ottenere trascritti personalizzati in modo efficiente.
Yaohai Bio-Pharma ha sviluppato un insieme di tecnologie di sintesi di mRNA per fornire RNA di alta qualità, come il design e l'ottimizzazione delle sequenze, IVT, purificazione, liofilizzazione e incapsulamento in nanoparticelle lipidiche (LNP). Tutti i prodotti vengono rilasciati secondo standard rigorosi di controllo qualità (QC).
Con l'esplosione della pandemia di COVID-19 nel 2020, la tecnologia mRNA ha fatto passi da gigante, e le relative ricerche e applicazioni hanno raggiunto uno sviluppo senza precedenti, inclusi vaccini preventivi per la prevenzione delle malattie infettive, vaccini oncologici terapeutici e farmaci, terapia tumorale, terapia di sostituzione proteica, medicina rigenerativa e terapia cellulare e genetica (CGT).
vaccino mRNA | terapie mRNA |
|
Processo | Servizio Opzionale | Dettagli del servizio | Periodo di consegna (giornata lavorativa) | Prodotto consegnabile |
progettazione e ottimizzazione della sequenza mRNA | Progettazione e ottimizzazione delle sequenze codificanti | Progettazione della sequenza CDS e ottimizzazione dei codoni | 1-3 | File di sequenza |
Progettazione e ottimizzazione di sequenze non codificanti | Progettazione e ottimizzazione di UTR, sequenze polyA | |||
Preparazione del Plasmide Modello per la Trascrizione | Preparazione di plasmidi ricombinanti | Sintesi genica | 7-10 | |
Amplificazione ed estrazione di plasmidi | 4 | |||
Linearizzazione e purificazione di plasmidi | ||||
trascrizione in Vitro di mRNA | Chiusura co-trascrizionale (metodo a un passo) | Trascrizione in vitro (IVT) / Analoghi di Cap | 1-2 | N/D |
Modifiche dei nucleotidi (modifiche UTP/CTP) | ||||
Rimozione del template DNA (DNase I) | ||||
Cappatura enzimatica (processo in due fasi) | IVT | 2-3 | ||
Modifiche dei nucleotidi (modifiche UTP/CTP) | ||||
Rimozione del template DNA (DNase I) | ||||
purificazione mRNA (precipitato di cloruro di litio/paramagnetici) | ||||
Cappatura enzimatica | ||||
purificazione di mRNA | Schema di purificazione convenzionale | Precipitazione con cloruro di litio | 1 | sostanza farmaceutica mRNA |
Purificazione con paramagnetici | ||||
Schema di purificazione con colonna cromatografica | Combinazione di più metodi di cromatografia | 1-2 | ||
Scambio di tampone | Ultrafiltrazione | 1 | ||
liofilizzazione di mRNA | Liofilizzazione | Precongelamento | 2-3 | polvere liofilizzata mRNA |
Essicazione primaria (sottrazione) | ||||
Essicazione secondaria (disassorbimento) | ||||
encapsulamento mRNA | Incapsulamento LNP | Incapsulamento LNP | 2-3 | prodotto farmaceutico mRNA-LNP |
Concentrazione e scambio di tampone | ||||
analisi della qualità dell'mRNA | sostanza farmaceutica mRNA / polvere liofilizzata | Concentrazione, purezza | 1 | Rapporto di prova |
Integrità, efficienza di cappatura, distribuzione della coda polyA | 2-5 | |||
prodotto farmaceutico mRNA-LNP | Efficienza di incapsulamento | 1 | ||
Dimensione delle particelle e distribuzione | ||||
Carica superficiale | ||||
validazione dell'espressione mRNA | valutazione della cellula 293T | Coltivazione di cellule | 4 | |
Trasfezione transitoria di cellule | ||||
Osservazione del segnale di fluorescenza | 1-3 | |||
Western blot (WB) / Test Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) |
5' Cap |
▪ Senza Cap ▪ Cap0, co-cap ▪ Cap1, co-cap ▪ Cap1, incappucciamento enzimatico |
5' UTR/3' UTR |
▪ Sequenza UTR naturale ▪ Sequenza UTR mutante/intrattenuta |
coda PolyA 3' |
▪ Coda di 100A ~120A (consigliata) ▪ Coda polyA segmentata ▪ Altre code personalizzate |
Nucleosidi modificati |
▪ Basi non modificate ▪ Pseudouridina (Ψ) ▪ N1-Metilpseudouracile (N1Ψ) ▪ 5-metilcitosina (m5C) ▪ 5-metiluracile (m5U) ▪ 5-metossiuracile (5moU) ▪ 2-tioracile (s2U) ▪ 2′-O-metil-U ▪ Altre modifiche |
Flusso di Servizi Integrati
Fornire una serie di servizi dal progetto della sequenza iniziale alla preparazione del mRNA finale, controllo qualità e validazione dell'espressione.
Progettazione e Ottimizzazione delle Sequenze all'Avanguardia a Livello Internazionale
La progettazione e l'ottimizzazione professionale delle sequenze mRNA facilitano un'espressione mRNA efficiente.
Modifiche Nucleotidiche Diversificate
Aumentano efficacemente l'espressione mRNA e riducono le risposte immunitarie indesiderate degli mRNA.
Piattaforma di Purificazione Matura
Combinando un metodo di purificazione convenzionale e auto-progettato, si ottengono campioni mRNA ad alta purezza.
Piattaforma QC Completa
Arricchiscono le opzioni QC per soddisfare i requisiti dei test di routine, come concentrazione, purezza A260/280 e integrità, nonché i requisiti di alto controllo qualità, come efficienza di incappucciamento/distribuzione polyA.
Consegna veloce
L'mRNA personalizzato può essere consegnato in quanto minimo 7 giorni, eccetto per la sintesi esterna della sequenza.