Heute ist Yaohai so aufregend, sein In-vitro-Transkriptionsprotokoll für lange RNA zu teilen. Es ist eine effektive Strategie, die Wissenschaftler häufig verwenden, um RNA im Labor herzustellen. Auf diese Weise können Forscher eine signifikant große Menge an langer RNA herstellen – etwas, das für die Forschung in verschiedenen biologischen Bereichen von entscheidender Bedeutung ist. Hier bieten wir eine Schritt-für-Schritt-Anleitung für die Herstellung langer RNAs durch In-vitro-Transkription. Wir werden auch darüber sprechen, wie wir den Prozess verbessern können, und versuchen, einige der Probleme zu lösen, mit denen Sie bei der Synthese langer RNA konfrontiert sind.
Für die In-vitro-Transkription werden mehrere wesentliche Komponenten benötigt, insbesondere lange RNA. Sie müssen ein Enzym namens RNA-Polymerase, Schreibmaterial in Form von Nukleotidtriphosphaten (NTPs), einen Puffer zur Unterstützung der Reaktion und eine DNA-Vorlage bereitstellen. Eine detaillierte Anleitung, wie Sie Schritt für Schritt vorgehen, finden Sie hier:
Für den reibungslosen Ablauf der RNA-Synthese sind mehrere Faktoren von großer Bedeutung. Besonders wichtig ist die Menge an Magnesiumionen im Puffer selbst. RNA-Polymerase benötigt eine beträchtliche Menge Magnesium, um eine ordnungsgemäße Interaktion mit der DNA-Vorlage und die anschließende Faltung der RNA zu unterstützen. Ein zweiter wichtiger zu berücksichtigender Aspekt ist die Konzentration der DNA-Vorlage. Insbesondere müssen Sie über eine ausreichende DNA-Vorlagenreaktion verfügen, um gute RNA-Ausbeuten zu erzielen.
Lange RNA bringt natürlich ihre eigenen Probleme mit sich. Diese Probleme können mit dem Abbau der RNA zusammenhängen, die Faltung der RNA beeinflussen und Strukturen aufbauen, die möglicherweise die Synthese der RNA beeinträchtigen. Eine Möglichkeit, diese Herausforderungen zu bewältigen, besteht darin, den verwendeten Puffer anzupassen. Für eine umfassendere Struktur der RNA können Forscher verschiedene spezielle Chemikalien wie DTT und p-Mercaptoethanol hinzufügen, um die korrekte Faltung der RNA zu unterstützen und ein Zusammenkleben oder Verklumpen zu verhindern.
Darüber hinaus sind nicht alle langen RNA-Typen gleich und manche erfordern möglicherweise alternative Synthesemethoden. Es gibt spezielle Merkmale, die Forscher der RNA hinzufügen müssen, wie z. B. das Hinzufügen einer 5-Kappe oder eines Poly-A-Schwanzes. Wenn dies erforderlich ist (wie später erläutert), sollten Forscher andere Enzyme wie Guanylyltransferase und Poly(A)-Polymerase einbeziehen. Man muss auch ein geeignetes RNA-Polymerase-Enzym auswählen, das es ihnen auf natürliche Weise ermöglicht, mehr RNA zu produzieren. Sobald lange RNA synthetisiert werden muss, müssen wir die besten Bedingungen ermitteln.
Lange RNAs in vitro-TranskripteDas Protokoll für lange RNAs in vitro-Transkripte findet in verschiedenen Forschungs-, Test- und Therapiebemühungen Anwendung. Es hilft Wissenschaftlern, die Struktur von RNA und ihre Funktionsweise zu verstehen und wie sie Gene mit modernen Technologien verändern können. Die Entdeckung verschiedener Krankheiten und ihrer Behandlungsmöglichkeiten, wie beispielsweise aktuelle RNA-Therapien, lässt uns glauben, wie nützlich diese Einlesetechnologie für die Medizin sein kann.
Die Verwendung dieses Protokolls bietet viele Vorteile. Eine elektrophoresebasierte Methode ist im Allgemeinen die effizienteste und kostengünstigste Methode, um große Mengen langer RNA herzustellen. Neben der Qualität der RNA ist auch eine gute Ausbeute ein wichtiger Faktor für Forscher, der sie bei ihrer Forschung unterstützt, insbesondere wenn sie aufgrund des hohen Ausgangsmaterials große Mengen RNA für Experimente benötigen. Darüber hinaus ist die In-vitro-Transkription für lange RNA in der Regel genauer und reproduzierbarer als die chemische Synthese oder zelluläre Synthese von RNA.
Yaohai BioPharma ist ein Top-10-CDMO für Mikroben, der das In-vitro-Transkriptprotokoll für lange RNA sowie regulatorische Angelegenheiten umfasst. Wir verfügen über ein Qualitätsmanagementsystem, das den aktuellen GMP-Standards sowie den globalen Vorschriften entspricht. Unser Team aus Regulierungsexperten ist mit den globalen regulatorischen Rahmenbedingungen vertraut, um die Markteinführung biologischer Produkte zu beschleunigen. Wir gewährleisten rückverfolgbare Produktionsprozesse und Qualitätsprodukte sowie die Einhaltung der Vorschriften der US-amerikanischen FDA und der EU-EMA. Auch die australische TGA und die chinesische NMPA sind zufrieden. Yaohai BioPharma hat das Audit vor Ort durch die qualifizierte Person (QP) der Europäischen Union für unser GMP-Qualitätssystem sowie unsere Produktionsanlage erfolgreich bestanden. Darüber hinaus haben wir die ersten Zertifizierungsaudits des Qualitätsmanagementsystems ISO9001, des Umweltmanagementsystems ISO14001 und des Arbeitsschutzmanagementsystems ISO45001 bestanden.
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