Rekombinant Proteinproduktion: Designede E. coli-stammer

Escherichia coli (E. coli) har spillet en betydelig rolle i produktionen af rekombinante proteiner i biotekfarmaceutisk industri, hvor den har fungeret som den første udtryksvektor til fremstilling af biologisk medicin. E. coli har fordele såsom hurtigt vækst, let genetisk manipulation og hurtig syntese af rekombinante proteiner. Udvidede ændringer har gjort E. coli til en optimal valgmulighed for proteinekspression, hvilket har ført til udviklingen af flere designede E. coli-stammer.

Yaohai Bio-Pharma specialiserer sig i at levere alt-i-et outsourcing-tjenester inden for fermentering, renings-, formuleringprocessens udvikling og produktion af en række biotekfarmaceutiske produkter ved hjælp af E. coli-udtryksystemer. Med hensyn til Yaohaıs omfattende erfaring har vi samlet op på, at fire almindelige E. coli-stammer bruges til produktion af rekombinante proteiner og deres egenskaber.

BL 21 stamme

Afledt fra E. coli B-stamme mangler BL21-stammen Lon protease og ytre membranprotease OmpT. Lon protease degraderer hovedsageligt fremmede proteiner, mens OmpT hovedsageligt degraderer ekstracellulære matrixproteiner. Fraværet af disse to vigtige proteaser kan effektivt forhindre degradationsprocessen af rekombinante proteiner.

Origami stamme

Origami stamme, en afledning af E. coli K-12, har mutationer i thioredoxinreduktase og glutathionreduktase, hvilket faciliterer opbygningen af korrekt foldede proteiner med disulfidbindinger og forbedrer proteinkvalitet og -opløselighed. Origami stammen, herunder Origami, Origami 2 og Origami B, er egnet til udtryk af aktive proteiner med disulfidbindinger.

SHuffle stamme

SHuffle-slægtningen udtrykker konstitutionelt disulfidbindingisomeraset DsbC i cytoplasma, hvilket fremmer opbygningen af korrekte disulfidbindinger i oxiderede proteiner. Den fungerer også som en molekylær chaperon for proteinfoldering, hvor den hjælper med at danne den korrekte konformation.

Rosetta-slægtning

Rosetta-slægtningen supplenterer E. coli med tRNA'er, der svarer til sjældne codoner, med det formål at forbedre udtryksniveauet af fremmede gener, især eukaryotiske gener, i prokaryotiske systemer. Afledt fra BL21 og bærende chloramfenikolresistant pRARE-plasmid supplenterer den seks tRNA'er, der svarer til sjældne codoner (AUA, AGG, AGA, CUA, CCC og GGA), som oprindeligt var fraværende i E. coli, hvilket giver en mere "universel" proteinudtryk.

Konklusion

De tre hovedfaktorer for en succesfuld produktion af rekombinante proteiner er værtsorganismen, vektor og kulturbetingelser. Basert på en forståelse af de fysikokemiske egenskaber af det rekombinante protein, de unikke fordele af hver strene, og den specifikke behov af eksperimentet, bør den mest egnet vært blive valgt. Desuden bør faktorer som plasmidvektorer, temperatur og induceres blive optimeret for at forbedre proteinudtrykket.

Yaohai Bio-Pharma søger også aktivt globale partnere, både institutionelle og individuelle, og tilbyder den mest konkurrencedygtige kompensation i branchen. Hvis du har nogen spørgsmål, tøv ikke med at kontakte os: [email protected]