Rekombinant proteinproduktion: Konstruerede E. coli-stammer

Escherichia coli (E. coli) har spillet en væsentlig rolle i produktionen af ​​rekombinante proteiner i den biofarmaceutiske industri, der tjener som den første ekspressionsvektor til fremstilling af biologisk medicin. E. coli kan prale af hurtig vækst, bekvem genetisk manipulation og hurtig syntese af rekombinante proteiner, blandt andre fordele. Omfattende modifikationer har gjort E. coli til et optimalt valg for proteinekspression, hvilket har ført til design af forskellige konstruerede stammer af E. coli.

Yaohai Bio-Pharma har specialiseret sig i at levere one-stop outsourcing-tjenester til fermentering, oprensning, formuleringsprocesudvikling og produktion af en række biofarmaceutiske produkter ved hjælp af E. coli-ekspressionssystemer. Med hensyn til Yaohais omfattende erfaring opsummerede vi, at fire almindelige E. coli-stammer bruges til rekombinant proteinproduktion og deres egenskaber.

BL 21 stamme

Afledt af E. coli B-linjen mangler BL21-stammen Lon-protease og ydre membranprotease OmpT. Lon-protease nedbryder primært eksogene proteiner, mens OmpT hovedsageligt nedbryder ekstracellulære matrixproteiner. Fraværet af disse to nøgleproteaser kan effektivt forhindre nedbrydningen af ​​rekombinante proteiner.

Origami-stamme

Origami-stamme, et derivat af E. coli K-12, har mutationer i thioredoxinreduktase og glutathionreduktase, som letter dannelsen af ​​korrekt foldede proteiner indeholdende disulfidbindinger og øger proteinopløseligheden. Origami-stammen, herunder Origami, Origami 2 og Origami B, er velegnet til ekspression af aktive proteiner indeholdende disulfidbindinger.

SHuffle stamme

SHuffle-stamme udtrykker konstitutivt disulfidbinding-isomerasen DsbC i cytoplasmaet, hvilket fremmer dannelsen af ​​korrekte disulfidbindinger i oxiderede proteiner. Det tjener også som en molekylær chaperone til proteinfoldning, der hjælper med dannelsen af ​​den korrekte konformation.

Rosetta-stamme

Rosetta-stammen supplerer E. coli med tRNA'er svarende til sjældne kodoner, med det formål at forbedre ekspressionsniveauet af eksogene gener, især eukaryote gener, i prokaryote systemer. Afledt af BL21 og bærer det chloramphenicol-resistente pRARE-plasmid, det supplerer seks tRNA'er svarende til sjældne kodoner (AUA, AGG, AGA, CUA, CCC og GGA), der oprindeligt var fraværende i E. coli, hvilket giver en mere "universel" proteinekspression.

Konklusion

De tre hovedfaktorer for vellykket produktion af rekombinante proteiner er værts-, vektor- og kulturbetingelser. Baseret på en forståelse af det rekombinante proteins fysisk-kemiske egenskaber, de unikke fordele ved hver stamme og eksperimentets specifikke behov bør den bedst egnede vært udvælges. Derudover bør faktorer såsom plasmidvektorer, temperatur og inducere optimeres for at øge proteinekspressionen.

Yaohai Bio-Pharma søger også aktivt institutionelle eller individuelle globale partnere og tilbyder den mest konkurrencedygtige kompensation i branchen. Hvis du har spørgsmål, er du velkommen til at kontakte os: [email protected]