Optimering af Rengøringsprocessen for Rekombinant Menneskelig Insulin

I de seneste år har væksten i antallet af diabetes-patienter drivet efterspørgslen efter insulin, men billigt insulin er i korte forsyninger. Effektiv og økonomisk insulinproduktion er afgørende. Insulin produceres hovedsagelig via Escherichia coli (E. coli) og gær på grund af deres hurtige vækst og lave omkostninger, mens E. coli står over for kompleks nedstrømsbehandling.

Oversigt over Nedstrømsbehandling:

Rensning af rekombinant menneskelig insulin fra E. coli inklusionslegemer involverer flere trin, herunder genvejring, vaskning, opløsning og oxidation, afskæring, bufferudskiftning, kromatografisk rense, nedbrydning, renaturering, enzymatisk afskæring og formulering.

Yaohai Bio-Pharma har udvidet erfaring inden for produktion og rense af rekombinant insulin, kombineret med en gruppe af eksperter, hvilket sikrer, at din insulinproduktion udføres med høj effektivitet. Ved hjælp af vores erfaring fra hundreder af projekter summerer Yaohai venligt op, hvordan man kan optimere Nedstrømsrensningsprocessen for Rekombinant Menneskelig Insulin.

Genopretning og vask af inklusionslegemer:

Celler forstyrres ved hjælp af mekaniske metoder (som ultralyd, højtrykshomogenisering) eller lysozymbehandling, efterfulgt af vaskingsbuffer (der indeholder urea, Triton X-100 osv.) for at fjerne forurenninger. Under vaskningen skal parametre optimeres for at sikre proteinkvaliteten samtidig med at kontrollere omkostningerne.

Opløsning og oxidation af inklusionslegemer:

Højkoncentrerede denaturanter (som guanidinhydrochlorid og urea) bruges til at opløse inklusionslegemer, med dithiothreitol eller β-merkaptoetanol tilføjet for at forhindre opbygningen af forkerte disulfidbindinger. pH og temperatur påvirker betydeligt opløsnings- og oxidationssammenhængene.

Kleaving og bufferudveksling:

Cyanogenbromidspaltning bruges til at fjerne det N-termindende startaminoacid, men den stiller toxicitets- og lavspecifitetsproblemer. Gennem dialyse, ultrafiltration eller størrelseseksklusionskromatografi fjerner bufferudveksling skadelige reaktiver i forberedelse på efterfølgende operationer.

Kromatografisk renessering og nedbrydning:

Flere kromatografiske teknikker anvendes til at rense insulin, herunder affinitetskromatografi, jonswapeskromatografi, reversed-phase-kromatografi, hydrofobisk interaktionseksklusionskromatografi og størrelseseksklusionskromatografi. Nedbrydningsmetoder såsom pH-nedbrydning og zinkkristallisering bruges til at fjerne forurenstillinger og koncentrere protein.

Renaturering:

Det opløste protein dilueres i en renatureringsbuffer for at fremme den korrekte dannelsen af disulfidbindinger og proteinfalding. Proteinfaldningsvæskelighedskromatografi og dialyse er også metoder, der bruges til renaturering.

Enzymspaltning og formulering:

Trypsin og carboxypeptidase B bruges til at klæve C-peptidet, hvilket danner den aktive insulin-heterodimer. Til sidst anvendes krystallisation og lyophilisering for at fjerne rester af salter og buffer, for at forberede en stabil formulering. Bestemte tilføjelser (som zink og protamin) føjes for at opfylde forskellige kliniske behov.

Konklusion:

Efterbehandling af insulin fra E. coli er kompleks. Fremtidig fokus bør være på at optimere disse trin for effektiv, økonomisk produktion for at møde efterspørgsel og reducere omkostningerne.

Yaohai Bio-Pharma søger også aktivt globale partnere, både institutionelle og individuelle, og tilbyder den mest konkurrencedygtige kompensation i branchen. Hvis du har nogen spørgsmål, tøv ikke med at kontakte os: [email protected]