Optimering af oprensningsprocessen for rekombinant humant insulin

I de senere år har væksten af ​​diabetespatienter drevet insulinefterspørgslen, men der er mangel på insulin til en overkommelig pris. Effektiv, økonomisk insulinproduktion er afgørende. Hovedsageligt produceret via Escherichia coli (E. coli) og gær på grund af hurtig vækst og lave omkostninger, står E. coli over for kompleks nedstrømsbehandling.

Oversigt over downstream-behandling:

Oprensning af rekombinant humant insulin fra E. coli inklusionslegemer involverer flere trin, herunder genvinding, vask, solubilisering og oxidation, spaltning, bufferudveksling, kromatografisk oprensning, præcipitation, renaturering, enzymatisk spaltning og formulering.

Yaohai Bio-Pharma kan prale af omfattende erfaring i rekombinant insulinproduktion og -rensning, kombineret med et team af eksperter, der sikrer, at din insulinproduktion fuldføres med høj effektivitet. Ved at udnytte vores erfaring fra hundredvis af projekter opsummerer Yaohai venligt, hvordan man optimerer nedstrøms oprensningsprocessen for rekombinant human insulin.

Inklusion kropsgendannelse og vask:

Celler afbrydes ved hjælp af mekaniske metoder (såsom ultralydbehandling, højtrykshomogenisering) eller lysozymbehandling, efterfulgt af vaskebuffere (indeholdende urinstof, Triton X-100 osv.) for at fjerne urenheder. Under vask skal parametre optimeres for at sikre proteinkvaliteten og samtidig kontrollere omkostningerne.

Inklusionslegemesolubilisering og oxidation:

Højkoncentrationsdenatureringsmidler (såsom guanidinhydrochlorid og urinstof) bruges til at solubilisere inklusionslegemer med dithiothreitol eller β-mercaptoethanol tilsat for at forhindre dannelsen af ​​forkerte disulfidbindinger. pH og temperatur påvirker solubiliserings- og oxidationsreaktionerne markant.

Spaltning og bufferudveksling:

Cyanogenbromidspaltning bruges til at fjerne den N-terminale initierende aminosyre, men det giver problemer med toksicitet og lav specificitet. Gennem dialyse, ultrafiltrering eller størrelsesudelukkelseskromatografi fjerner bufferudveksling skadelige reagenser som forberedelse til efterfølgende operationer.

Kromatografisk oprensning og udfældning:

Der anvendes flere kromatografiske teknikker til at oprense insulin, herunder affinitetskromatografi, ionbytterkromatografi, omvendt fase-kromatografi, hydrofob interaktionskromatografi og størrelsesudelukkelseskromatografi. Udfældningsmetoder, såsom pH-fældning og zinkkrystallisation, bruges til at fjerne urenheder og koncentrere proteiner.

Renaturering:

Det solubiliserede protein fortyndes i en renatureringsbuffer for at fremme den korrekte dannelse af disulfidbindinger og proteinfoldning. Proteinfoldende væskekromatografi og dialyse er også metoder, der anvendes til renaturering.

Enzymatisk spaltning og formulering:

Trypsin og carboxypeptidase B bruges til at spalte C-peptidet, der danner den aktive insulin-heterodimer. Endelig anvendes krystallisation og lyofilisering til at fjerne resterende salte og buffere, hvilket fremstiller en stabil formulering. Specifikke tilsætningsstoffer (såsom zink og protamin) tilsættes for at imødekomme forskellige kliniske behov.

konklusion:

Nedstrøms forarbejdning af insulin fra E. coli er kompleks. Fremtidigt fokus bør være på at optimere disse trin til effektiv, økonomisk produktion for at imødekomme efterspørgslen og reducere omkostningerne.

Yaohai Bio-Pharma søger også aktivt institutionelle eller individuelle globale partnere og tilbyder den mest konkurrencedygtige kompensation i branchen. Hvis du har spørgsmål, er du velkommen til at kontakte os: [email protected]