Кэпінг 5'-канца з'яўляецца істотнай мадыфікацыяй мРНК. мРНК з кэп-структурамі, асабліва структуры Cap1, палягчаюць мРНК ухіленне ад прыроджаных імунных рэакцый in vivo, што прыводзіць да эфектыўнай трансляцыі бялку.
Ферментатыўнае закрыццё (двухэтапны метад) - гэта звычайны метад закрыцця мРНК, падобны да працэсу закрыцця ў эўкарыятычных арганізмах. Пад дзеяннем шэрагу ферментаў 7-метылгуанін (m7G) злучаецца з 5'-канцом мРНК праз 5'-5' трыфасфатную сувязь і падвяргаецца мадыфікацыі метылявання з адукацыяй кэп-структуры Cap 1 (m7GpppN).
Схема фарміравання натуральнай структуры шапкі
Працягласць рэакцыі ферментатыўнага каўпачэння выглядае наступным чынам:
Лінеарызаваная плазмідная ДНК выкарыстоўваецца ў якасці матрыцы для транскрыпцыі in vitro (IVT) у прысутнасці палімеразы Т7, і мРНК са структурай 5'-канцавога каўпачка ўтвараецца пасля аднаэтапнай ачысткі з выкарыстаннем фермента кэпінгу вакцыны і 2'-O -метилтрансфераза.
Падрабязнасці паслуг
Дадатковая паслуга | Падрабязнасці аб паслузе | Тэрмін дастаўкі (дзень) |
ферментатыўнае кэпаванне мРНК | Ферментатыўная рэакцыя кепирования | 1 |
Аптымізацыя рэакцыі абмежавання - неабавязкова | Дызайн і аптымізацыя кампанентаў рэакцыі | 3 ~ 7 |
нашы Асаблівасці
- Дызайн і аптымізацыя кампанента рэакцыі укупорке
Кампанент рэакцыі каўпачэння аптымізаваны, і вытворчасць стэнаграмы мРНК значна павялічваецца.
- Праверка экспрэсіі in vitro
Кэпіраваная мРНК трансфецыруецца ў клеткі 293T, і можа быць выяўлена экспрэсія бялку-мішэні.
Дзякуючы строгаму кантролю эксперыментальнага асяроддзя RNaseson і расходных матэрыялаў, дэградацыя мРНК эфектыўна прадухіляецца.
Кейс
Платформа мРНК Yaohai Bio-Pharma стварыла ідэальны працэс рэакцыі каўпачка.
Для мРНК eGFP, папярэдняга прадукту мРНК, атрыманага шляхам ферментатыўнага капіравання, сігнал флуарэсцэнцыі eGFP (зялёная флуарэсцэнцыя) на высокім узроўні можна назіраць пасля трансфекцыі клетак 293T на працягу 24 гадзін, што выяўляецца Вестэрн-блот (ВБ), дэманструючы, што Зялёны флуоресцентный бялок, узмоцнены мэтавым бялком (eGFP), можа быць эфектыўна экспрэсаваны in vitro.
Экспрэсія ферментатыўна закрытай мРНК eGFP у клетцы 293T
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
НЕ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
