У параўнанні з двухэтапным ферментатыўным каўпачэннем, аднаэтапны метад сумеснага транскрыпцыйнага каўпачэння можа значна скараціць ход працэсу. Метад арыентаваны на вынік і прадугледжвае даданне аналагаў кэпа ў рэакцыю транскрыпцыі in vitro (IVT). Кэп-аналагі могуць быць уведзены ў пачатку транскрыпцыі, а мРНК з кэп-структурай можна атрымаць пасля завяршэння транскрыпцыі. Цяперашнія аналагі кэпа трэцяга пакалення могуць пазбегнуць зваротнага кэпінгу і непасрэдна дадаць структуру Кэп 1 да прадукту транскрыпцыі.
З меркаванняў імунагеннасці мРНК in vivo і эфектыўнасці трансляцыі ў працэсе IVT часта выкарыстоўваюцца пэўныя тыпы мадыфікаваных NTP, а распаўсюджанымі мадыфікаванымі нуклеатыдамі з'яўляюцца псеўдаурыдын (Ψ), N1-пазначаў-псеўдауры-дын (N1Ψ) і 5-метылцытазін (5mC) .
Малюнак: Дыяграма рэакцыі сумеснай транскрыпцыі і закрыцця мРНК
Падрабязнасці аб паслузе
абслугоўванне |
Падрабязнасці аб паслузе |
Перыяд дастаўкі (рабочы дзень) |
Катранскрыпцыйнае кэпаванне |
Транскрыпцыйны адказ in vitro (аналаг Clean Cap) |
1-2 |
| Мадыфікацыі нуклеатыдаў (Ψ/N1Ψ/5mC) |
| Выдаленне шаблону ДНК (DNase I) |
Аптымізацыя стану IVT - неабавязкова |
Дызайн і аптымізацыя кампанентаў рэакцыі |
3-7 |
нашы Асаблівасці
- Разнастайныя стратэгіі мадыфікацыі нуклеатыдаў
Некалькі неабавязковых стратэгій мадыфікацыі нуклеатыдаў могуць палепшыць экспрэсію бялку.
- Аптымізаваная сістэма рэакцыі
Дасягнуць высокага каэфіцыента транскрыпцыі і высокай эфектыўнасці абмежавання.
- Стабільны працэс укупорки
Дасягнуць хуткасці абмежавання больш за 95%.
Эфектыўнае прадухіленне дэградацыі мРНК шляхам строгага кантролю РНКазы ў эксперыментальным асяроддзі і расходных матэрыялах.
Кейс
Кампанія Yaohai Bio-Pharma стварыла дасканалую платформу для працэсу капінгавання сумеснай транскрыпцыі, выкарыстоўваючы чыстыя аналагі кэпа для непасрэднага дадання структуры Cap1, пазбягаючы пры гэтым зваротнага капінгавання. Пасля стандартызаванай папярэдняй апрацоўкі ўзору і выяўлення капілярным электрафарэзам (CE) хуткасць закрыцця мРНК узмоцненага зялёнага флуарэсцэнтнага бялку (eGFP) можа дасягаць больш за 95%.
Эфектыўнасць закрыцця мРНК eGFP больш за 95%
МРНК eGFP і мРНК mCherry, атрыманыя шляхам сумеснага транскрыпцыйнага капіравання, трансфікуюцца ў клеткі 293T адпаведна, і праз 48 гадзін назіраецца моцны флуарэсцэнтны сігнал, што сведчыць аб эфектыўнай экспрэсіі мРНК у клетках 293T.
Экспрэсія мРНК eGFP і мРНК mCherry ў клетках 293T
BE
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
НЕ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
MK
UR
BN
