Што тычыцца серыйнага падрыхтоўкі папярэднікаў РНК, то звычайна выкарыстоўваецца метад транскрыпцыі in vitro (IVT). Рэакцыя IVT выкарыстоўвае лінеарызаваную плазмідную ДНК, якая змяшчае прамотар Т7, у якасці матрыцы і сінтэзуе папярэднік РНК з нуклеазідтрыфасфатамі (НТФ) у якасці субстрата ў прысутнасці РНК-палімеразы Т7.
Метады цыклізацыі in vitro ўключаюць хімічнае лігаванне, ферментатыўнае лігаванне і метад перастаўленага інтрон-экзона (PIE). Хімічная перавязка і ферментатыўная перавязка падыходзяць для цыклізацыі больш кароткіх РНК. Калі фрагмент большы за 100 нт, хуткасць цыклізацыі значна знізіцца. Наадварот, метад нуклеазы, заснаваны на сістэме PIE, можа дасягнуць цыклізацыі паслядоўнасцей памерам 8 кб.
Пад каталізам гуанозінтрыфасфату (GTP) структура PIE падвяргаецца цыклізацыі экстраінтронных паслядоўнасцей. У спалучэнні з разумнай стратэгіяй павелічэння хуткасці цыклізацыі Yaohai Bio-Pharma можа дасягнуць цыклізацыі паслядоўнасцей да 4 кб з эфектыўнасцю цыклізацыі больш за 80%.
Рэакцыя цыклізацыі РНК in vitro працякае наступным чынам:
Папярэднік РНК сінтэзуецца з дапамогай транскрыпцыі in vitro, а кампанент PIE завяршае самазрошчванне пад каталізам GTP з адукацыяй circRNA.
Падрабязнасці паслуг
| Працэс | Падрабязнасці аб паслузе | Перыяд дастаўкі (рабочы дзень) |
| Транскрыпцыя і цыркуляцыя in vitro | Пацвярджэнне сістэмы рэакцыі | 1-2 |
| Рэакцыі транскрыпцыі і цыклізацыі in vitro |
| Пераварванне РНКазы R |
| Аптымізацыя рэакцыі | Склад рэакцыі, аптымізацыя часу | 2-5 |
нашы Асаблівасці
- Строгі дызайн і аптымізацыя тэстаў
Можа быць дасягнута да 4 кб цыклізацыі РНК.
- Высокая эфектыўнасць цыклізацыі
Хуткасць цыклізацыі больш за 80% можа быць дасягнута з дапамогай рацыянальнай стратэгіі аптымізацыі паслядоўнасці.
Дзякуючы строгаму кантролю РНКаз ў эксперыментальным асяроддзі і расходных матэрыялах эфектыўна прадухіляецца дэградацыя РНК.
Кейс
Цыклізацыя in vitro і ўзбагачэнне circRNA
На аснове сістэмы PIE кампанія Yaohai Bio-Pharma аптымізавала паслядоўнасць circRNA з хуткасцю цыклізацыі больш за 80% з дапамогай электрафарэзу ў агарозным гелі (AGE). Выкарыстанне РНКазы R для ўзбагачэння цырРНК, вынікі электрафарэзу ў электронным гелі паказваюць, што папярэднік лінейнай РНК пераварваецца, і пасля далейшай ачысткі большую частку цырРНК, разрэзанай, можна выдаліць. Раствор для ачысткі распрацаваны кампаніяй Yaohai Bio-Pharma.
Цыркуляцыя in vitro і ўзбагачэнне circRNA
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
НЕ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
